李思莹 周萍萍 齐艳秀 张 剑 王玉清 （佳木斯大学附属第一医院眼科，佳木斯154002）

视网膜母细胞瘤（retinoblastoma，Rb）是一种常见致死性眼内肿瘤，高发于儿童［1］。与其他恶性肿瘤相比，Rb发病率较低，但若治疗不当则发展迅速，常发生脑转移，死亡率较高［2］。长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是长度大于200 个核苷酸的缺乏蛋白编码能力的RNA，通过调节肿瘤相关基因或通路发挥致癌基因或抑癌基因功能，与肿瘤细胞增殖、凋亡、周期阻滞和侵袭有关［3-4］。多个与肿瘤相关的lncRNA 参与Rb进展，并是Rb的诊断标志物和治疗靶点［5］。LINC00467 是近年发现的肿瘤相关RNA，研究显示，LINC00467高表达与结肠癌患者总体生存期、无复发生存期较短有关，下调LINC00467 表达可抑制结直肠癌细胞增殖和转移［6］。肝癌中 LINC00467 呈高表达，可抑制肝癌细胞生长和转移，促进细胞凋亡［7］。生物信息学分析显示，miR-495-3p 是LINC00467 的潜在靶基因。miR-495-3p 已被证实在骨肉瘤中具有抑癌基因作用［8］，但 LINC00467 是否具有抗 Rb 作用，其作用是否与调控miR-495-3p 表达有关尚未阐明。本研究探讨 LINC00467、miR-495-3p 在 Rb 中的生物学作用，以期为Rb分子治疗提供新靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂与仪器 人Rb 细胞系Y79（美国菌种保藏中心）；胎牛血清（美国Hyclone 公司）；RP‑MI1640 培养液（美国Gibco 公司）；TRIzol 试剂（美国Invitrogen公司）；PrimeScript RT 试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒（美国Promega 公司）；SYBR Premix ExTaq、Mir-X miRNA First Strand Synthesis 试剂盒（中国TaKaRa 公司）；LINC00467特异性小干扰RNA（si-LINC00467）、乱序无意义阴性对照序列（si-NC）、miR-495-3p 模拟物（miR-128-3p mimics）、模拟物阴性对照（miR-NC）、miR-495-3p 抑制物（antimiR-182-5p）、抑制物对照（anti-NC）由上海吉玛制药公司提供；MTT（美国Sigma 公司）；膜联蛋白-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）细胞凋亡检测试剂盒（上海钰博生物公司）；……