曹晓丹 魏任雄 张晓霞 周 俊 （浙江中医药大学附属宁波中医院男科实验室，宁波315010）

不育症日益受到社会的广泛关注，我国约有15%~20%的育龄夫妇不能生育，男性因素约占50%［1-4］。免疫性不育是在某些外因或内因的诱发下，自身免疫耐受状态被打破，持续迁延的自身免疫对自身抗原产生异常的免疫应答，导致免疫调节失衡，进而导致疾病发生。滤泡辅助性T（T follicular helper，Tfh）细胞由 IL-21 等诱导 Th0 分化产生，是真正意义上辅助B 细胞的一群新的CD4+Th 细胞亚群［5］。Tfh 细胞的产生和功能表达受多种因素调控。Bcl-6 等被认为是Tfh 细胞产生和分化的关键分子，IL-4、IL-21等细胞因子是Tfh细胞和B细胞状态和功能的关键指标。本研究通过建立免疫性不育小鼠模型，分析免疫性不育小鼠与健康对照小鼠脾脏淋巴细胞中滤泡辅助性T细胞相关细胞因子变化，探讨滤泡辅助性T细胞在免疫性不育发病过程中的意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF 级BALB/c小鼠，雄性，35只，6~8 周龄，体重16~18 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。对BALB/c 小鼠昼夜12 h 交替光照，自由食水，于室温（23±1）℃条件下饲养。

1.1.2 仪器与试剂 IL-4、IL-12、IL-17、IL-21 ELISA试剂盒（美国BioLegend公司）；Trizol试剂、反转录试剂盒、RT-PCR 试剂盒（日本TaKaRa 公司）；APC 标记抗小鼠CD4 单克隆抗体、PerCP/Cy5.5 标记抗小鼠CXCR5 单克隆抗体、FITC 标记抗小鼠ICOS 单克隆抗体（美国eBioscience 公司）；小鼠抗精子抗体检测试剂盒（上海恒远生物科技有限公司）；iMark 酶标仪（美国Bio-Rad 公司）；ABI 7500 PCR 仪（美国ABI 公司）；FACSCanto Ⅱ流式细胞计数仪（美国BD公司）。qPCR 特异引物由Primer5 软件设计（表1），上海桑尼生物科技有限公司合成。

表1 Bcl-6、IL-4、IL-12、IL-17、IL-21基因引物序列Tab.1 Primer sequences of Bcl-6，IL-4，IL-12，IL-17，IL-21

1.2 方法

1.2.1 免……