周丽娜 李东良 潘晨 林春 吴海聪 周晓玲

目前肝移植已被公认为治疗终末期肝病最可靠的治疗手段之一[1]，但肝移植后黄疸很常见,Hubscher SG等报道在非选择性肝穿刺病理活检中高达55%～90%的移植肝都可出现不同程度的肝内胆汁淤积[2]，部分患者伴随不可逆的肝脏损害，甚至可致受体死亡或移植肝无功能，需要再次肝移植[3-5]。且其病因复杂又可能同时并存，确切发生机制仍不明确。近期大量胆汁淤积的动物模型研究表明肝细胞毛细胆管膜上的转运蛋白可能与肝内胆汁淤积的发病机制有一定的关系，但缺乏在人体肝组织中的表达数据。本研究主要观察肝移植术后黄疸患者肝组织外排转运蛋白BSEP、MRP2和MDR3蛋白的表达变化，试图探求肝移植术后黄疸的发生机制，为其靶向性精准治疗提供理论依据。

资料与方法

一、研究对象

收集2006-2017年南京军区福州总医院肝移植术后新发黄疸并行肝穿刺活组织检查的患者25例，同时选择同期行肝血管瘤手术且肝功正常的患者18例并取其瘤旁正常肝组织。该研究经医院医学伦理委员批准。

二、实验试剂

苏木素-伊红染色液、10%过氧化氢等试剂均为实验室内自配试剂。免疫组化一抗BSEP鼠单克隆抗体BSEP(F-6)：sc-74500(美国Santa Cruz公司1∶200)、MRP2鼠单克隆抗体(英国Abcam 1∶200)、MDR3兔多克隆抗体(英国Abcam 1∶50)二抗EliVisionTM plus 试剂盒、山羊血清封闭液、AEC 显色和封片剂、0.01 M 柠檬酸-柠檬酸盐修复液(pH 6.0)、0.01 MPBS(pH 7.4)、多聚赖氨酸防脱片剂等均购自迈新生物技术有限公司。

三、实验方法

所有病例组及对照组标本均使用16G肝穿针，活检取肝组织标本，经40 g/L中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片3 μm厚。……