黎敏航 蔡碧莲 蒋云霞 罗伟生

肝硬化是临床各种慢性肝病发展的结果，调查结果显示，中国有约700万人罹患肝硬化，每年有46万肝癌新发病例[1]。肝纤维化是肝硬化的前兆，肝脏受到损伤后，肝星状细胞(liver stellate cells，HSC)被激活并增殖，转化为肌成纤维细胞，分泌细胞外基质(ECM)成分，HSC激活是肝纤维化过程中的关键事件[2-4]。探索HSC的激活机制对肝纤维化的临床与基础研究有积极意义。

材料与方法

一、仪器与试剂

大鼠肝星状细胞HSC-T6购自中国科学院昆明动物研究所细胞库、雄性SD大鼠购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司、MTT试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司、BCA蛋白浓度测定盒购自北京碧云天生物技术公司、高效液相色谱仪UltiMate 3000 UHPLC、串联质谱仪Q-Exactive HF由赛默飞世尔科技有限公司提供。

二、血清制备

雄性清洁级SD大鼠30只，体质量为(200±10)g，适应性喂养3 d后，随机分为实验组和正常组，其中正常组10只，实验组20只。实验组每周2次四氯化碳皮下注射诱导肝纤维化，共10周，病理检查确认大鼠肝纤维化模型造型成功后，在无菌状态下采集血清。正常组在相同条件下饲养相同天数，在无菌状态下采集血清。

三、细胞培养以及血清干预

HSC-T6放置在含10%胎牛血清的DMEM培养液中，37 ℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养，待贴壁率为95%时，胰酶消化传代，每3～4天进行一次。取对数成长期的第4代，MTT法测定2组血清对相应组别的HSC的最大无毒浓度(TC0)，作为细胞干预的诱导剂量。以实验组血清TC0浓度干预实验组HSC，先使用实验组血清预诱导液(20%实验组血清TC0的DMEM),24 h后弃去,加入完全的实验组诱导液(100%实验组血清TC0的DMEM)。……