廖太阳 王培民 徐波 张力 李晓辰 吴鹏 邢润麟 黄正泉 张农山△

《OARSI膝骨关节炎非手术治疗指南》认为异常机械应力是膝骨关节炎(KOA)发病的高危因素，力学干预被推荐为治疗的核心等级[1]。细胞焦亡与细胞膜上的多种离子通道的开闭密切相关[2]，其中Piezo1离子通道能够感受多种力学刺激并迅速响应，介导多种2价阳离子内流，是完全意义上的力敏感离子通道及机械敏感性阳离子通道[3]。中医学“久行伤筋”经典理论与现代异常机械应力存在某些契合之处，笔者探究在异常机械拉伸应力的作用下，是否通过激活滑膜巨噬细胞表面Piezo1离子通道，介导细胞焦亡及推动KOA炎症反应。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级别雄性SD大鼠5只，体质量180～200 g，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，动物许可证号为SYXK(苏)2017-0001。

1.2 实验药物及试剂

Piezo1抑制剂GsMTx4(批号为B5762，美国APE分子生物公司)；MitoSOXTM红色线粒体超氧物指示剂(批号为M36008，美国 Thermo 公司)；乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(批号为C0016，碧云天)；细胞凋亡Hoechst33342/PI 双染试剂盒(批号为CA1120，索莱宝公司)；白介素-1β(Rat，IL-1β)、白介素-18(Rat，IL-18)、ELISA试剂盒(批号为F15810，F15950，上海西唐生物公司)；活性氧(ROS)检测标准试剂盒(批号为S0033，上海Beyotime生物公司)；Caspase-1 p10 抗体(批号为P29466，Bioworld 生物科技公司)；Caspase-1一抗、GSDMD一抗、β-actin内参抗体(批号为ab1872，ab219800，ab8227，Abcam公司)；胰蛋白酶消化液、培养基(美国Gibco公司)。

1.3 实验仪器

细胞牵张拉伸应力加载实验系统(型号为FX-5000T)；BioFlex专用板(美国flexcell细胞力学公司)；酶标仪(美国 Enspire 公司)；蛋白电泳系统，电泳凝胶成像系统，超灵敏化学发光成像系统LAS-4000(美国GE公司)；荧光倒置显微镜(型号为DMI-3000B，德国莱卡生物公司)。……