薛纯纯 王拥军 梁倩倩 施杞 李晓锋△

骨保护素(Osteoprotegerin，OPG)在骨代谢调控过程中具有重要的作用[1]，全身性OPG基因敲除小鼠(OPG-/-小鼠)出现严重的骨质疏松表型[2]，因此后续的研究以该模式动物为研究对象，主要聚焦于以骨质疏松为主的骨代谢疾病中[3-5]，关于软骨退行性疾病(如椎间盘退变)的研究较少。

多种细胞表达和分泌OPG，软骨细胞和纤维环细胞同样表达OPG[6]，笔者发现OPG-/-小鼠随着增龄椎间盘退变逐渐加重，软骨终板部分骨化[7]，炎性因子表达，新生血管形成[8]。健腰密骨片是上海市名中医施杞教授治疗骨质疏松症的经验方，原发骨质疏松症和椎间盘退变均属于骨或/和关节的退行性疾病，基于中医“肾主骨”和异病同治原则，采用健腰密骨片早期干预OPG-/-小鼠，观察该方是否具有延缓OPG-/-小鼠椎间盘退变的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

SPF级10周龄雄性OPG-/-小鼠和WT小鼠购自上海南方模式生物中心(合格证号：SCXK(沪)2005-0002)，其中OPG-/-小鼠20只，WT小鼠10只，饲养在SPF级动物房，自由进食及饮水。适应性饲养2周后，30只小鼠随机分为3组，分别为WT、OPG-/-、健腰密骨片组，每组各10只。

1.2 主要试剂

免疫组化试剂盒(美国Invitrogen公司)，Trizol(美国Sigma公司)，逆转录试剂盒和荧光定量试剂(大连宝生物工程有限公司)，蛋白酶K(德国Merck公司)，多克隆兔抗I型胶原抗体(美国Abcam公司)，多克隆兔抗Ⅱ型和Ⅹ型胶原抗体(美国Sata Cruz Biotechnology公司)，甲苯胺蓝染液、苏木素染液(国药集团化学试剂有限公司)。

1.3 主要仪器

离心机(德国Eppendorf公司，5417R)，组织脱水机(德国LEICA公司，TP1020)，轮转式切片(德国LEICA公司，RM2135)，光学显微镜(日本Olympus，BH-20)，紫外分光光度计(美国Beckman公司，DU 800)，荧光定量PCR仪器(美国BIO-RED公司，CFX96)。……