孙 原，侯晓冬，杨延雯，李艳玲，李 弘，石秋艳

(1.华北理工大学附属医院神经内科，河北 唐山 063000；2.河北省唐山市人民医院病案科，河北 唐山 063001)

缺血预处理(ischemic preconditioning)是器官的短期缺血适应，可以在永久性缺血坏死之前起到保护作用，但完整的分子机制仍不明确[1]。据报道，氧化应激反应、线粒体损伤和细胞凋亡激活在缺血预处理后均被抑制。近年来有研究提出，自噬也许参与了缺血预处理的重要环节来减轻神经损伤[2]。本研究通过制作大鼠缺血再灌注模型，并对部分大鼠事先进行缺血预处理，探索自噬在大鼠脑缺再灌注损伤中的具体作用及可能的分子机制。进一步为脑缺血的防治提供可能策略。报告如下。

1 材料与方法

1.1动物实验的设计 选择中国解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所的Sprague-Dawley雄性大鼠(8～9周龄，0.23～0.27 kg)。实验前大鼠处于12/12 h明/暗周期，并维持40%～60%相对湿度、(23±2)℃温度，保证实验动物获得标准啮齿动物饲料和自来水。依照《实验动物护理和使用指南》进行所有动物实验。将100只大鼠随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)，缺血预处理组(C组)，缺血再灌注+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)组(D组)，缺血预处理+3-MA组(E组)，每组20只。2%戊巴比妥钠(50 mg/kg)麻醉实验动物，并为保持其体温在37 ℃，将其置于加热垫上。

1.2试剂 TTC染色液(上海信帆生物科技有限公司)，3-MA(Sigma，美国)，全蛋白提取试剂盒(南京凯基生物)，磷酸盐缓冲液(PBS，赛默飞公司，美国)，兔抗鼠 Beclin-1、兔抗鼠LC3-Ⅱ(Cell Signaling，美国)，GAPDH(Kangchen，美国)，Western blot 发光试剂盒(Millipore，美国)；浓缩型DAB试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。……