曾胜，陈佳汝，张荣，路鹏飞

骨肉瘤是一种多发于儿童或青少年的恶性骨肿瘤，目前其预后效果并不理想，而快速的肺部转移是导致骨肉瘤高死亡的重要原因；因此，深入探讨骨肉瘤发生发展的分子机制对更精准更好的治疗骨肉瘤具有重要意义。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类短小的非编码RNA，可在转录后水平调控基因的表达，通过调节癌细胞的生物学行为（增殖、凋亡、侵袭等），参与多种肿瘤的病理进程，包括骨肉瘤。MiR-216b-5p是miR-216家族成员，在胰腺癌、肾癌和宫颈癌等呈现较低水平，显示出抗癌活性。然而，miR-216b-5p 在骨肉瘤中的详细功能及机制尚未完全阐明。因此，本研究自2019年1-7 月观察miR-216b-5p 在骨肉瘤MG63 细胞增殖、侵袭和凋亡中的作用与机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

Transwell 小室购于美国Corning 公司，1640 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、Lipofectamine 3000和Trizol试剂购于美国Life technology 公司，二甲基亚砜和MTT 试剂购于美国Sigma 公司，Matrigel 基质胶购于美国 BD 公司，miR-216b-5p mimics、miR-216b-5p inhibitor 及 其 相 应 阴 性 对 照mimics-NC、inhibitor-NC 购于上海 GenePharma 公司。双荧光素酶报告基因系统检测试剂盒购于美国Invitrogen 公司，细胞凋亡检测试剂盒、逆转录试剂盒和BCA 蛋白检测试剂盒购于上海碧云天公司。兔抗人高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体购于美国Santa Cruz 公司。二氧化碳细胞培养箱和NanoDrop2000c 紫外分光光度计购于美国Thermo Scientific 公司，DM4000B正立显微镜购于德国Leica公司，CFX96实时荧光定量PCR仪购于美国Bio-Rad 公司，DTX880 酶标仪购于美国Beckman Coulter 公司，Tanon-6600 凝胶成像仪购于上海天能公司。

1.2 细胞培养、分组与转染

人骨肉瘤细胞系MG63购于中科院上海细胞库，培养箱条件为饱和湿度、37 ℃、5%二氧化碳，培养基为RPMI-1640培养基（含100 U/mL 青-链霉素双抗和10%胎牛血清）。……