血清miR-221与催乳素水平对老年非酒精性脂肪性肝病的早期诊断价值研究

2021-07-14唐改香李娅张旭

肝脏 2021年6期

关键词：血清

唐改香李娅张旭

据估计，全世界非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)的患病率约为25%[1-4]，早期诊断NAFLD具有重要意义，病理活检为有创性检查，而超声、磁共振及CT也存在各种缺陷[5-6]。近年来的研究表明miRNA在NAFLD的发生和发展中起着重要作用[7-11]。催乳素(PRL)是一种垂体来源的激素，最近被证明与脂肪肝的发生发展密切相关[12]。本研究的目的是探讨miR-221和催乳素水平对NAFLD的早期诊断价值。

资料与方法

一、研究对象与分组

招募解放军总医院2019年1月至2019年12月行肝脏彩超的患者，纳入标准：①饮酒量<20 g/d；②病理诊断为SNAFL或NASH。排除标准：①慢性肝炎病毒感染；②服用可致肝脂肪变性药物(如糖皮质激素、他莫昔芬、胺碘酮、甲氨蝶呤或丙戊酸钠)；③自身免疫性肝病；④存在急性感染；⑤不能接受肝脏活检术；⑥严重器官功能不全；⑦经超声或活检诊断为肝纤维化或肝硬化；⑧恶性肿瘤；⑨1型糖尿病、甲状腺机能亢进症或甲状腺功能减退症、高催乳素血症。所有患者均先行肝脏彩超筛查NAFLD，再对超声确诊患者行肝脏活检以明确NAFLD的诊断，并使用SAF评分确定组织学分级和NAFLD分期，SNAFL以活检标本中>5%的肝细胞脂肪浸润为标准，NASH在SNAFL基础上合并小叶内炎症及干肝细胞气球样变性。本研究共纳入65例NAFLD患者，其中SNAFL组40例，NASH组25例。同时招募30例健康老年体检者作为对照。

二、仪器与方法

(一)血样收集 NAFLD患者于肝活检后1个月内，对照与初入院时在禁食状态下采集血样，所有样品在4 ℃和1 500×g下离心10 min分离血清，然后在-80 ℃中保存。

(二)PRL定量使用自动化学发光免疫分析仪IMMULITE 2000(英国西门子公司)对血清样本进行PRL定量。

(三)RNA抽提及实时定量PCR 用miRNeasy serum/plasma kit (Qiagen Venlo,Nederland)(QIGEN公司)提取血清中miRNA，使用miScript II reverse transcription kit (QIGEN公司)对血清microRNA进行逆转录，使用Applied Biosystems TaqMan1MicroRNA Assays (Applied Biosystems公司)和ABI 7900HT PCR仪(Applied Biosystems公司)对血清microRNA进行定量。

miR-221正向引物GTTCGTGGGAGCTACAT-TGTCTGC；反向引物GTGTCGTGGAGTCGGCAA-TTC；以U6基因作为内参，U6正向引物 GTG-CTCGCTTCGGCAGCACATATATAC；U6反向引物AAAAATATGGAACGCTTCACGAATTTG。

三、统计学方法

结果

一、miR-221和PRL在NAFLD患者与对照组血中的表达量

NAFLD组血清miR-221相对表达量为10.76±0.40，高于对照组的10.25±0.51；NAFLD组血清PRL值为(13.09±0.56)ng/mL，低于对照组的(13.99±0.52)ng/mL，差异均有统计学意义(P<0.01)。

二、miR-221和PRL对NAFLD的诊断效能评估

miR-221与PRL对NAFLD诊断的 AUC值分别为0.795(95%CI：0.702～0.899)及0.880(95%CI：0.805～0.955)，P<0.001。见图1。根据ROC曲线确定的miR-221与PRL最佳灵敏度和特异度下截断值分别为10.26和13.73。miR-221对诊断NAFLD的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及约登指数分别为63.3%、84.6%、83.3%、65.5%、0.48；PRL对诊断NAFLD的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及约登指数分别为83.3%、87.7%、91.9%、75.8%、0.71。