田安然，徐瑞瑞，胡平平，李毓雯，朱传龙

延伸因子结合蛋白2(elongation factor Tu GTP-binding domain-containing 2，EFTUD2)是一种剪接体GTP酶，参与机体许多重要的生物学过程，例如针对肝炎病毒入侵时的先天免疫应答[1,2]、癌症的发生[3,4]、神经发育[5]、细胞的成熟分化[6]和颅面畸形[7,8]等。EFTUD2在肝炎病毒感染过程中发挥不可或缺的调控作用。然而，针对EFTUD2的靶向细胞模型还较少。因此，本研究旨在利用HepG2细胞构建以EFTUD2为靶点的化合物筛选细胞模型，不仅为后续筛选可上调EFTUD2表达的化合物奠定研究基础，而且也为开发治疗慢性乙型肝炎新型药物提供新思路。

1 材料与方法

1.1 细胞、试剂与仪器 HepG2细胞株由哈佛大学Wenyu Lin教授提供。LV6载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G质粒(上海吉玛基因股份有限公司)；高纯度质粒小提试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒(天根生化)；中量质粒抽提试剂盒(杭州爱思进生物技术有限公司)；XbaI和BamHI DNA内切酶(加拿大MBI Fermentas公司)；嘌呤霉素(生工)；青霉素和链霉素(上海碧云天生物有限公司)；Polybrene(美国Sigma-Aldrich公司)；荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国promega公司)；ClonExpress© Entry One Step Cloning Kit(南京诺唯赞生物科技有限公司)；胎牛血清、DMEM培养基、Opti-MEM培养基(美国Gibco公司)。AIRTECH 超净工作台(苏州安泰公司)；GloMaxTM20/20 发光检测仪，GloMaxTM96 微孔板发光检测仪(美国promega公司)。

1.2 细胞培养 取HepG2细胞，用含有10%胎牛血清的DMEM培养基培养，常规加入抗生素(青霉素100 u/ml，链霉素0.1 mg/ml)。细胞的培养环境为37℃，5% CO2。当单层贴壁细胞生长密度约80%时进行传代。

1.3 LV6慢病毒载体构建和包装 LV6载体含有EF-1a启动子，嘌呤霉素筛选标记，无荧光标签。通过融合PCR技术将hEFTUD2pro-0.5kb基因片段和来自LV17载体的荧光素酶基因片段组成目的片段Epro0.5-LUC。……