张晓丹 1，徐毅 1，杜德奇 1，郭莹 2，王鲁文

（郑州市妇幼保健院 1.产科；2.妇科，河南郑州 450000；3.郑州大学第三附属医院妇科，河南郑州 450000）

宫颈癌是女性生殖系统最常见的3种恶性肿瘤之一，在妇科中死亡率最高[1]。临床上对于早期宫颈癌的治疗多以手术切除为主，辅以化学疗法、中药和生物疗法[2]。尽管在诊断技术和治疗方法上取得了长足进步，但由于复发和转移，宫颈癌患者的长期生存率仍然很差，5年生存率仅为50%～70%[3]。因此，迫切需要找到宫颈癌的新型治疗靶标和诊断生物标记物。

三结构域蛋白59（tripartite motif‑containing 59，TRIM59），是三结构域蛋白家族成员，在肿瘤细胞增殖、凋亡和侵袭中发挥着重要作用[4]。TRIM59可作为癌基因，在胃癌、肝癌、肺癌和结直肠癌等肿瘤中高表达[5]。已有研究表明，TRIM59在宫颈癌中高表达，TRIM59敲低可引起S期细胞周期阻滞[6]。但TRIM59在宫颈癌中的具体作用机制尚不清楚，本文旨在探究沉默TRIM59对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭与迁移能力的影响。

1 材料与方法

1.1 实验试剂

DMEM培养基（11965‑175）、胎牛血清（10099‑141）、青‐链 霉 素（15140‑122）和 胰 蛋 白 酶（25200‑056）购自美国Gibco公司；shRNA TRIM59载体、shRNA‑NC由上海生工生物工程股份有限公司合成；Transwell（PIEP12R48）购自美国Millipore公司；Annexin V‑FITC细胞凋亡检测试剂盒（C1062S）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012S）、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（A0208）购自上海碧云天生物技术研究所；兔抗单克隆抗体TRIM59（ab69639）、Ki67（ab15580）、c‑Myc（ab39688）、PC‐NA（ab18197）、Bax（ab104156）、Bcl‑2（ab194583）、Caspase‑3（ab13847）和Actin（ab5694）购 自 英 国Abcam公司。

1.2 细胞培养

宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞株来源于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，置于37℃，5%CO2恒温培养箱中用高糖DMEM培养基（含10%胎牛血清和1%青‐链霉素）培养，每3天更换1次培养基，收集细胞时用0.25%胰蛋白酶消化，试验选用对数生长期细胞。……