潘姝，姜珊珊，原永芳

(上海交通大学医学院附属第九人民医院，上海 200011)

吉西他滨(gemcitabine,Gem)是胰腺癌的一线用药[1]。除了细胞毒性，吉西他滨还具有免疫调节作用。如吉西他滨可选择性作用于调节性T细胞、B淋巴细胞等[2]。然而，吉西他滨对巨噬细胞的作用尚未见报道。

基于巨噬细胞的免疫疗法相比放疗、化疗及手术疗法具有更好的疗效及耐受性[3]。巨噬细胞约占实体瘤免疫细胞总量的5%～40%，是种类最丰富的免疫细胞[4]。研究表明，M1型巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用[5]。巨噬细胞通过内吞、分泌肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα，TNF-α）、IL-6、IL-1及产生NO及活性氧来发挥抗肿瘤作用[6]。本研究拟探讨吉西他滨对M1型巨噬细胞功能的影响，并对其机制进行研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂

1.1.1 细胞及培养 小鼠巨噬细胞Ana-1购自中国科学院上海生物化学与生物学研究所细胞库。细胞培养于含10%（φ）FBS及1%青霉素链霉素的RPMI-1640培养基中，细胞放置于含5%（φ）CO2的37℃恒温培养箱中。

1.1.2 材料与试剂 盐酸吉西他滨购自上海源叶生物科技有限公司；细胞周期检测试剂盒及Griess试剂购自碧云天生物科技研究所；IFN-γ购自塞业生物科技有限公司；LPS购自Sigma-Aldrich公司；TNF-α和IL-6检测试剂盒购自上海船夫生物技术有限公司；ROS检测试剂盒购自凯基生物技术股份有限公司；FcRγ组织剂（FCGR2/CD32和FCGR/CD16）和PE-conjugated I-A/I-E抗体购自BD公司；LC3-Ⅱ和β-actin购自Cell Signaling Technology公司；山羊抗兔免疫球蛋白G二抗购自上海明睿生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞吞噬实验 将巨噬细胞Ana-1培养在共聚焦皿里，300 IU/mL的IFN-γ和100 ng/mL的LPS及100 ng/mL吉西他滨在37℃环境下共同处理24 h。……