朱子鹏，刘 娜，李 影，王 辰,2，张 璇,2，顾 斌

1 解放军总医院第一医学中心 口腔科，北京 100853；2 解放军总医院研究生院，北京 100853；3 解放军总医院第一医学中心 骨科研究所，北京 100853

牙 髓干细 胞(dental pulp stem cells，DPSCs)于2000年由Gronthos等[1]在人恒牙牙髓组织中分离培养出，其可多向分化、高度增殖，并且能形成牙髓-牙本质复合体。还能够分化为脂肪、肌肉、软骨、神经等细胞类型。由于其获取方便、易于保存，逐渐成为组织细胞工程中的研究热点。牙髓干细胞可以通过诱导活化T细胞参与机体的免疫调节，是一种理想的干细胞来源，为神经损伤和神经退行性疾病的治疗提供了一种新思路[2]。目前认为牙髓干细胞作为种子细胞参与组织工程有一定优势，但其免疫学特性及作用机制尚不明确。研究发现研究肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α，TNF-α)可以通 过 核 转录因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路促进DPSCs向成骨细胞分化[3]。另有研究发现DPSCs可使调节性T细胞显著增加，辅助性T17细胞减少[4]。CD3+T细胞是主要的免疫效应细胞。所以在本实验中，我们用TNF-α刺激细胞模拟炎症微环境，初步探索在炎症微环境中DPSCs与CD3+T细胞共培养后成骨细胞相关因子、炎性因子和Wnt经典通路因子的mRNA表达情况。

材料和方法

1 材料 α-MEM培养基，胎牛血清(Gibco美国)；PBS缓冲液(HyClone美国)、Ⅰ型胶原酶(Sigma美国)、0.25%胰蛋白酶-EDTA(Gibco美国)、青链霉素(Gibco美国)。人牙髓干细胞成骨诱导分化完全培养基、人牙髓干细胞成脂诱导分化完全培养基(Cyagen美国)、外周淋巴细胞分离液(天津灏洋)、RPMI 1640培养液(Gibco美国)。CCK8试剂盒(日本同仁)；实时定量PCR仪(Applied Biosystems 7500，美国)；RNA提取和逆转录试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)；……