高分辨熔解曲线技术结合荧光实时PCR法同时检测鸡肉中4种食源性致病菌
2021-06-30张静周倩唐梦君张小燕唐修君陆俊贤高玉时顾荣
现代食品科技 2021年6期
张静,周倩,唐梦君,张小燕,唐修君,陆俊贤,高玉时,顾荣
(江苏省家禽科学研究所,江苏扬州 225125)
食品安全是关系到民生的重大事件,目前由于食源性致病菌引起的疾病在世界各国都引起重视,特别是微生物食物中毒事件[1]。国内目前在禽肉食品中常见的食源性致病菌主要有沙门氏菌[2,3]、单增李斯特菌[4-6]、金黄色葡萄球菌[5,7]和空肠弯曲菌[8,9]。由于禽肉产品中的高携带率和污染状况,建立能同时检测上述4种菌快速检测与鉴定方法是及时有效地控制和预防致病菌传播的前提。
目前食源性致病菌的检测方法主要包括传统培养法与生理生化检验,以及包括酶联免疫法、分子生物学方法等快速检测技术。传统的检测方法无法对难培养或不可培养的致病菌进行检测,且耗时费力,获得结果通常需要几天的时间,不能实现有效的监测和预防作用。且单独检测一种致病菌已无法满足现今社会对致病菌检测高效率的要求。多重PCR是在同一反应管中同时完成多种致病菌的高效PCR扩增,从而实现多种致病菌DNA的同步快速检测的技术。由于多重PCR可降低致病菌检测过程中样本、物资、试剂、工作量等占用的时间和空间,多重PCR技术在降低检测成本方面显得非常经济[10]。高分辨熔解曲线分析技术(High Resolution Melting,HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同熔解曲线的基因分析技术,通过与实时荧光PCR相结合,可以实时监测温度上升时双链DNA的解链过程。且该技术达到了真正的闭管操作,避免传统荧光操作和凝胶分离步骤,降低交叉污染的可能性及整体分析时间[11]。……
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