顾玉微，王成云，顾 萍，潘秋辉，王 静，陈广洁

（1.上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心输血科，上海 200127；2.上海交通大学医学院，上海 200025）

ABO血型系统在输血医学、移植学和法医学中有着极其重要的作用，是目前最具临床意义的血型系统[1]。人类ABO血型基因位于9q34.1-34.2，含7个外显子和6个内含子，编码区长1 062 bp，基因上游5'非编码区存在1个总长度为18～20 kb的调控区[2-3]。ABO基因外显子和内含子的突变、插入或缺失，以及受不同mRNA转录剪接模式的影响，调控区出现等位基因重组、片段缺失、甲基化/去甲基化或CpG岛形成等，均可导致ABO抗原表达的弱化。本研究对1例ABO血清学鉴定困难的患儿进行基因序列测定和序列分析，查找抗原弱表达的原因。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取上海儿童医学中心心胸外科收治的二尖瓣返流患儿1例，女，12岁，术前检查发现血型鉴定正反定型不符。

1.2 仪器和试剂

WADiana/8XT全自动血型系统（西班牙Diagnostic Grifols S.A公司）及配套ABO-Rh血型确认卡（DG Gel Confirm卡）、中性卡（DG Gel Neutral卡）、抗球蛋白卡（DG Gel Coombs卡）。ABO反定型细胞、抗H抗体、筛选细胞均购自上海血液生物医药有限责任公司。DNA纯化试剂盒[生工生物工程（上海）股份有限公司]，聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增试剂（日本Takara公司），C1000 Touch Thermal Cycle PCR仪（美国Bio-Rad公司）。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 采集本例患儿的静脉血，乙二胺四乙酸二钾抗凝，抽提DNA，置于-20 ℃保存。

1.3.2 血清学试验 采用微柱凝胶法进行ABO血型鉴定、直接和间接抗球蛋白试验、抗体筛查试验。

1.3.3 基因分型试验 抽提患儿全血样本中的基因组DNA，采用PCR扩增ABO基因增强子、启动子、第1～7号外显子及其相邻的内含子区域序列。……