王静 任大宾 杨志文

1上海市松江区中心医院消化内科，上海 201600；2上海市松江区中心医院药剂科，上海 201600

研究表明，基因多态性可能是AP患者重要的影响因素之一，可以增加AP的发病风险。其中Toll样受体、肿瘤坏死因子α、IL-8、IL-1β、IL-6等炎症因子基因多态性是AP 严重程度和炎症进展中重要的易感因素[1-5]。胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain protein 9，Card 9)是一种表达于髓系细胞的接头蛋白，通常与Bcl 10蛋白相互作用，形成Card 9/Bcl 10复合体，然后激活NF-κB、MAPK炎症信号通路，释放大量炎症因子[6]。本课题组前期研究发现，AP患者外周血Card 9表达水平可作为评估患者病情严重程度的一个有效的临床监测指标[7]，沉默AP大鼠Card 9表达可抑制NF-κB、p38炎症信号通路，减轻胰腺的炎症损伤[8]。因此，本研究探讨Card 9基因多态性与AP患病风险的相关性。

资料与方法

一、研究对象

选取2019年6月至2020年2月间上海市松江区中心医院收治的70例AP 患者的临床资料。AP诊断均符合中华医学会消化病学分会胰腺疾病学组制定的标准[9]，其中MAP 34例，MSAP 27例，SAP 9例。以松江区中心医院体检健康者70例为对照组。所有受试者均排除慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等干扰指标，并签署知情同意书。

二、研究方法

1．Card 9基因多态性检测：抽取研究对象外周血1 ml于EDTA抗凝管，提取全血DNA。采用TaqMan探针法[10]检测Card 9基因rs10870077、rs4077515、rs10781499、rs141992399、rs139265120多态性位点。引物及探针序列见表1，均由上海生工生物工程股份有限公司合成。PCR反应条件为95℃ 5 min，95℃ 10 s、60℃ 30 s、60℃ 30 s，40个循环。每次循环后扫描荧光信号，利用Bio-Rad CFX96荧光定量仪读取信号，并利用机器自带软件进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)分型。……