刘梦倩，陶俊宇，胡雯月，韦英益，胡庭俊

(1.广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530005；2.广西医科大学基础医学院，广西南宁 530021；3.上海交通大学生命科学技术学院，上海 200030)

辣蓼黄酮是中草药辣蓼的一种有效成分。研究表明，辣蓼黄酮能降低LPS诱导的内毒素血症对小鼠造成的多脏器损伤[1-2]。辣蓼黄酮能降低脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎性因子分泌[3]。过量的LPS可激活单核巨噬细胞，并通过细胞内的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)和核转录因子(nuclear factor-κB，NF-κB)两条信号转导通路活化多种炎性因子[4]。在炎症反应中，激活的NF-κB会引起一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2型(COX-2)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种炎症因子的表达[5-6]。同时，MAPKs家族参与细胞生长、细胞分化、细胞死亡和免疫反应等多种生理活动的p38、ERK与JNK也会被炎症因子激活[7]。研究表明，JNK可保护细胞不受TNF-α诱导的凋亡，对细胞凋亡起着重要的调节作用[8]。活化的JNK可以使c-Jun的ser63和ser73位点发生磷酸化，从而合成诱生型iNOS和TNF-α的特异性转录激活因子AP-1。AMPK是炎性调节因子，其催化亚基AMPKα1在脂肪组织和巨噬细胞中有着较高的表达量，活化的AMPKα1可以抑制巨噬细胞的炎性[9]。本研究旨在通过构建体外炎症模型，测定炎症相关蛋白和磷酸化水平，探究辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)对LPS诱导的RAW264.7炎症反应的调节机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 脂多糖，Sigma公司产品；iNOS(D6B6S)兔抗单克隆抗体、COX2(D5H5)兔抗单克隆抗体、MAPK family antibody sampler kit 试剂盒、Phospho-MAPK family antibody sampler kit 试剂盒、AMPKα(D5A2)兔抗单克隆抗体、Phospho- AMPKα(Three172)(40H9)兔抗单克隆抗体、c-Jun(60A8)兔抗单克隆抗体、Phospho-c-Jun(Ser73)兔抗单克隆抗体、β-Actin(13E5)兔抗单克隆抗体、GADPH(14C10)兔抗单克隆抗体、辣根过氧化物酶连接的抗兔IgG，美国Cell Signaling Technology公司产品；……