李 丽，张辛铭，尹双辉，张涛涛，杨顺利，薛慧文

(1.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070；2.中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃兰州 730046；3.石家庄市兽用生物制品供应站，河北石家庄 050027)

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV) 属于尼多病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)成员，是引起猪流行性腹泻(Poreine epidemic diarrhea，PED)的病原。PED是一种急性接触性传染病，病猪的主要特征为腹泻、呕吐和脱水，对哺乳仔猪具有较高致死率。流行病学调查表明，PEDV已经遍及全球，给养猪业造成巨大损失[1-2]。膜蛋白(M)在PEDV结构蛋白中含量最多，在补体共同作用下能够诱导机体产生中和抗体。M蛋白编码基因与其它冠状病毒的M基因有较低的相似性，但是在不同PEDV毒株间具有较高的相似性。因此，M蛋白是PEDV检测以及病原成像等研究的理想靶标蛋白。

驼科和软骨鱼等动物体内存在着一种天然缺失轻链、仅有重链的抗体，称之为重链抗体(heavy chain antibodies，HCAbs)[3]。这类抗体仅通过重链可变区形成的结构来特异性识别和结合抗原，故称此可变区结构片段为单域抗体(single domain antibody，sdAb)。sdAb是目前可以得到的具有完整功能的最小抗体分子，分子质量仅15 ku，是单克隆抗体分子质量的1/3，又称为纳米抗体(nanobody)。sdAb具有结构简单易于基因工程改造，容易重组表达、高水溶性、耐高温和极端pH等独特性质[4-5]。此外，sdAb具有较强的组织渗透性，甚至能通过血脑屏障[6-7]，在肿瘤成像、肿瘤治疗和小分子抗体治疗药物研发等领域具有广阔应用前景[8-11]。本实验室前期筛选到了M蛋白特异性sdAb，并证实其具有较好的PEDV结合活性，在PEDV检测和分离方面具有较好的应用价值。……