朱梦云 ,崔双慧 ,郝泽宇 ,王文锐 ,杨清玲 ,陈昌杰 ,王剑锋,周 琦

1蚌埠医学院第一附属医院眼科,安徽 蚌埠 233004；2癌症转化医学安徽省重点实验室,安徽 蚌埠233030

后发性白内障(PCO)是白内障囊外摘除术术后视力再次下降的主要原因,成年人发生率为30%～50%,而儿童发生率为100%［1］。PCO发生的主要原因是白内障手术术后残余的晶状体上皮细胞(LECs)过度增殖、移行于后囊膜,并转化成纤维细胞,产生细胞外基质,引起后囊膜的混浊和皱褶［2］。目前临床上主要采用YAG激光后囊切开术治疗PCO,而Nd:YAG激光治疗的并发症较多。抗代谢药物虽对体外培养的晶体上皮细胞具有抑制作用,因其副作用而未能应用于临床［3］。姜黄素(Cur)是中药姜黄的最主要有效活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤细胞生长和转移的作用［4-6］。研究表明姜黄素能够抑制晶状体上皮细胞增殖和诱导细胞凋亡,但是其分子机制尚不清楚［7］。本研究拟在前人的研究基础上进一步从Wnt/β-catenin信号通路来探讨姜黄素诱导晶状体上皮细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制,以期为姜黄素用于临床防治PCO提供理论基础。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

实验用细胞株:人晶状体上皮细胞株(Human Len cell,HLEC-SRA01/04)购自广州赛库生物技术有限公司,姜黄素(麦克林生化科技公司),高糖型DMEM培养基(Gibco),胎牛血清(Lonsera),Annexin Ⅴ-FITC/PI凋亡试剂盒(Biosharp)；聚偏氟乙烯(PVDF膜)、ECL化学发光试剂盒(Millipore)；β-catenin、Cyclin D1、c-myc、Caspase-3、Caspase-9、Bax 及Bcl-2 抗体均(武汉博士德),Cyclin B1、CDK1及β-actin抗体(proteintech)；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔、兔抗鼠二抗(Biosharp)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组 人晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞培养于含20%胎牛血清、1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中,置于37 ℃、5%CO2的培养箱中培养,待细胞融合度为80%～90%时进行传代培养。……