华 慧,董 昕,张雨钊,方 凡,张蓓蓓,李向阳,于 倩,郑葵阳,颜 超

徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室,江苏省免疫与代谢重点实验室,徐州市感染与免疫重点实验室,江苏徐州221004

溃疡性结肠炎(UC)是炎症性肠病的一种,在我国已经成为一种常见的肠道疾病［1-2］,其病因复杂,一般认为与遗传、感染、环境、免疫平衡失调等因素有关［3-5］。近年研究表明蠕虫感染可有效防治炎症性肠病［6-7］,因此蠕虫来源的相关蛋白引起广泛关注［8-9］。

华支睾吸虫是蠕虫的一种,华支睾吸虫来源的分子伴侣CsHscB经生物信息学分析发现是共-分子伴侣家族成员,与其他来源的同家族成员相比,均含有高度保守的DnaJ和共-分子伴侣HscB结构域,作为共-分子伴侣Hsc20家族成员之一,提示CsHscB可能具有分子伴侣的一般功能［10-11］,但其具体研究目前未见报道。本课题组于体外重组合成rCsHscB,前期研究证实rCsHscB作为热休克蛋白家族成员之一,能够显著上调IL-10 的含量,诱导宿主负向免疫调控［12］,但其对慢性溃疡性结肠炎作用未知。为此,本研究在成功构建DSS诱导的慢性溃疡性结肠炎小鼠模型基础上,进一步研究华支睾吸虫来源的rCsHscB蛋白对慢性溃疡性结肠炎的作用,并探讨其可能机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物

50只6～8周(约20 g)清洁级雄性C57BL/6小鼠购自北京维通利华公司,饲养于徐州医科大学实验动物中心SPF级动物房。本研究已获徐州医科大学实验动物伦理委员会批准。

1.2 rCsHscB蛋白制备［12］

将PET-28a-CsHscB 质粒转化至E.coliBL21(DE3)中,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,HisTrap FF 柱纯化,使用高效内毒素清除剂去除内毒素,经十二烷基硫酸钠⁃聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS⁃PAGE)电泳鉴定,BCA法测定蛋白浓度后于-80 ℃保存备用。……