武 赟，胡文静，尚杨杨，汪荣泉

结直肠癌是全世界最常见的肿瘤之一，在癌症相关死亡原因中占第四位[1]。鉴定新的结直肠癌患者预后标志物具有临床应用价值。

miRNA对基因表达的转录后调节剂至关重要，参与多种生物学功能，如通过转录后调节各种癌基因和抑癌基因的表达控制细胞增殖，分化和凋亡；而且维持胚胎干细胞和人类肿瘤干细胞干性[2-4]。Ascl2编码的转录因子控制着肠道隐性干细胞和结肠癌祖细胞的命运[5-6]。本课题前期研究发现结肠癌细胞中Ascl2可以调控miRNA-200s的表达，从而对上皮间充质转变的可塑性产生影响，也可通过let-7b等调节结直肠前体细胞的干性[7-8]。

本研究使用生物信息学的方法，鉴定miRNA相关的Ascl2靶基因，并对其进行GO、KEGG分析，通过绘制PPI网络筛选关键基因，进一步结合TCGA数据集，探索其对结直肠癌患者潜在的临床预后价值，为结直肠癌提供新预后标志物。

1 资料与方法

1.1 数据收集 GSE34926和GSE69036表达数据来自GEO数据库，分别为对LS174T细胞干扰Ascl2表达前后miRNA与mRNA差异表达数据。545例结直肠癌病人临床数据及目标基因表达量来自TCGA数据库。

1.2 差异表达基因鉴定 GSE34926是比较干扰Ascl2前后的LS174T细胞的miRNA表达芯片的数据集。设定当Fold Change＞2或Fold Change＜0.5时，认为miRNA表达有显著差异。将标准化后的表达值取log2后，使用Helm绘图软件进行热图绘制。将得到的miRNA通过TargetScanHuman与miRBD进行靶基因预测，再通过Venn图寻找交集，得到Ascl2所介导差异表达的miRNA下游基因集，记为DEGs1。 数据集GSE69036为对LS174T细胞进行Ascl2干扰后与对照组相比，得出的受Ascl2所调控的下游靶基因。……