吴 斌,王美堂

脓毒症是由感染因素引起的最致命的全身性炎症综合征，可引起休克、多器官功能障碍综合征，甚至死亡[1]。急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是脓毒症最严重的并发症之一[2]。如果能在AKI早期进行干预，可显著降低脓毒症患者的病死率[3]。因此，研究脓毒症致AKI的病理生理改变机制，寻求有效治疗手段是一个亟待研究的课题。

miRNAs是一类非编码RNA，通过抑制翻译或降解mRNA来负调控基因表达[4]。目前关于miRNAs在脓毒症肾损伤中的研究较少[5]。已有研究发现miR-204可通过抑制核因子 κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）途径活化，抑制脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的RMCs细胞损伤[6]，miR-107则可通过诱导TNF-α分泌，加重肾小管上皮细胞损伤[7]。上述研究提示miRNAs在脓毒症致AKI的发生、发展中起着重要调节作用。先前研究发现miR-25在脓毒症患者体内表达下调[8]。Yao等[9]发现miR-25通过靶向PTEN抑制脓毒症诱导的心肌细胞凋亡。然而，miR-25是否脓毒症致AKI的发病机制尚不清楚。因此，本研究通过建立LPS诱导肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的细胞模型体外模拟AKI研究miR-25的保护性作用，旨在为临床治疗脓毒症致AKI提供新的治疗思路。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 HK-2细胞购自上海富衡生物科技有限公司。胎牛血清、青霉素-链霉素、Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）、Lipofectamine 3000转染试剂及TaqMan-MicroRNA逆转录试剂盒均购自美国Invitrogen公司。LPS购自美国Sigma-Aldrich公司。MiR-25模拟物（miR-25 mimic）、miR-25抑制剂（miR-25 inhibitor）和阴性对照物（negativecontrol,NC）购自上海吉凯基因医学科技股份有限公司，过表达BCL2L11质粒（pc-BCL2L11）及空载质粒（vector）均由上海生工生物工程有限公司负责构建。细胞计数试剂盒（Cell counting kit-8,CCK-8）购自日本Dojindo公司。RNA提取试剂、逆转录试剂盒及SYBR荧光定量试剂盒均购自日本Takara公司。……