李慧赟 王慧芳 孟晓丽 赵均 宋春英 郭兴萍

不孕症是指一年或以上时间未采取任何避孕措施，性生活正常(每周两次及以上)而没有成功妊娠[1]。有15%的夫妇在育龄期会发生不孕不育，其中有50%为男性不育。其中，无精子症占男性不育原因的20%[2]，包括梗阻性无精症(obstructive azoospermia, OA)和非梗阻性无精症(non-obstructive azoospermia,NOA)。OA患者可以通过附睾或睾丸外科取精获得精子，但NOA患者则失去了获得精子的机会。2011年Takuya Sato等提出了两种体外诱导精子发生的方法：一种是器官培养法，将新生小鼠睾丸组织撕成约1 mm3大小的组织块，置于1.5%琼脂糖凝胶上34℃、5%CO2培养箱中培养，获得精子并生育后代[3]；另一种是从未成熟小鼠睾丸分离收集生殖干细胞，将其移植到受体睾丸组织，然后组织培养，获得单倍体精子细胞，采用显微受精技术获得可育后代[4]。本研究利用白消安对雄性小鼠的生殖毒性及在体修复作用建立不同损伤程度的NOA动物模型，为生精障碍睾丸组织器官培养提供稳定的研究对象，为临床治疗NOA提供理论支持。首先，本研究通过HE染色和Johnsen法评估生精细胞损伤程度。接着，通过免疫组化法对受损严重组的生精小管进一步定位，判断损伤组织减数分裂阶段，评估可供组织体外培养的研究时间。

一、材料与方法

1.实验动物：BALB/c小鼠为SPF级实验鼠，生产许可证号[SCXK-(军)2012-0004]，使用许可证号[SYXK-(晋)2015-0001]。所用实验动物为6～8周龄性成熟的BALB/c雄性小鼠，共45只，平均体重约(27±3)g。

根据文献报道[5]，采用NIH、ICR、BALB/c 3个品系的小鼠在35 mg/kg白消安以上3个剂量组(35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg)获得无精子症模型动物。……