胡敏利，应双伟，罗文达

(温州医科大学附属台州医院血液肿瘤内科，浙江台州 317000)

急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种儿童常见的血液系统恶性肿瘤，其中约有15%为急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)[1-2]，而T淋巴细胞恶性增殖是T-ALL的重要特征之一[3-4]。微小RNA(miRNA)是一类广泛存在于真核生物体内的非编码RNA，可通过靶向相关基因调控细胞增殖，与包括T-ALL在内的多种疾病的发生、发展密切相关[5-8]。miR-92a-3p在T-ALL中异常低表达[9]，但其是否参与T-ALL细胞增殖过程并不清楚。本研究通过上调和下调miR-92a-3p表达观察miR-92a-3p对T-ALL SupT1细胞增殖的影响，并探讨其可能的分子机制，旨在揭示miR-92a-3p在T-ALL发病中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

miR-92a-3p模拟物及其抑制剂(货号：M-01-S、M-02，上海吉玛)，果蝇翅膀边缘出现缺口(NOTCH)信号通路相关蛋白NOTCH1、Jagged1、Hes1和β-肌动蛋白(β-actin)抗体(货号：ab194123、ab85763、ab108937、ab179467，英国Abcam)，噻唑蓝(MTT)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶制备试剂盒(货号：M8180、P1200，北京索莱宝)，SYBR Premix Ex Taq试剂盒(货号：DRR420A，日本TAKARA)。

1.2 方法

1.2.1分组与处理

实验分为4组，未转染组：正常培养；阴性对照组：转染阴性对照；模拟物组：转染miR-92a-3p模拟物；抑制剂组：转染miR-92a-3p抑制剂，每组设置3个复孔。将T-ALL SupT1细胞解冻复苏后，用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基在5% CO2、湿度饱和的37 ℃恒温培养箱内培养。将对数生长期的SupT1细胞种植到6孔板上后，培养至70%～80%融合度时，按照脂质体2000说明书根据实验分组分别将miR-92a-3p模拟物、miR-92a-3p抑制剂和阴性对照转染至SupT1细胞中。转染48 h后，收集各组细胞进行后续实验。

1.2.2实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测

Trizol试剂提取细胞总RNA，行逆转录；以逆转录产物为模板，根据上海生工生物合成的引物，上RT-qPCR仪进行扩增，具体步骤参照SYBR Premix Ex Taq试剂盒说明书。……