路 霞 杨亚东 郁 川 杜付玉 张春杰

（河南科技大学动物科技学院/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，洛阳 471023）

新发传染病是威胁人类健康和生命安全的重大医学问题，鼠伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium）是一种对人类健康和养殖业构成严重威胁的重要病原菌，目前该菌在我国的感染发病率居沙门菌感染的首位［1-2］。沙门菌感染常用抗生素进行治疗，而抗生素的使用导致临床沙门菌耐药菌株不断产生，使药物难以治疗鼠伤寒沙门菌引起的各种疾病［3］。近几年来，亚单位疫苗备受研究者的青睐，亚单位疫苗不仅组分明确、安全性良好，且生产便利［4］。因此，对鼠伤寒沙门菌潜在的毒力因子或保护性抗原的研究尤为重要。研究发现SseK1（Salmonella secreted effector K1）是一种由鼠伤寒沙门菌致病岛SPI-2上的毒力基因所编码并由Ⅲ型分泌系统（typeⅢsecretion system，T3SS）分泌的效应蛋白。其通过T3SS分泌系统被递送到宿主细胞中，使细菌能够侵入并持续存在于宿主体内［5-7］，而国内有关效应蛋白SseK1引起的炎症反应及该蛋白的抗原性研究尚未见报道，因此，本研究对鼠伤寒沙门菌SL1344的sseK1基因进行了克隆表达和纯化，并对其免疫生物学特性作了初步分析，为进一步研究鼠伤寒沙门菌与机体在感染和免疫方面的相互作用以及新型重组亚单位疫苗的开发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株及表达载体 鼠伤寒沙门菌SL1344、表达载体pET-32a、DH5α感受态细胞和大肠杆菌BL21都由本实验室保存；克隆载体pMD-18-T购自宝生物工程（大连）有限公司。

1.1.2 主要试剂及试剂盒 镍柱亲和层析蛋白纯化试剂盒、Taq PCR Master Mix（2×，blue dye）购自生工生物工程（上海）股份有限公司；……