徐 敏，周 壮，梁永辉

（1 海军军医大学附属长海医院创伤骨科，上海200433；2 苏州大学附属第二医院疼痛科）

腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation，LDH)好发于30～50 岁人群，临床表现包括腰痛、坐骨神经痛和马尾神经痛等[1]。近年来大量研究表明，中枢脑区功能及结构的适应性改变与疼痛调控过程相关[2]。本实验以单纯疱疹病毒(HSV)作为顺行标记神经环路的工具病毒，定位绘制自体髓核移植大鼠痛觉神经传导通路图，并通过免疫荧光增强方法比较各核团标记细胞的差异，探索可能参与腰椎间盘突出症源性疼痛中枢敏化的相关核团。

1 材料与方法

1.1 主要材料 成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠102 只，6～8 周，体重180～220 g，由苏州大学实验动物中心提供(苏SYXK2007-0035)。饲养于P2 实验室，2 只一笼，室温22 ℃，湿度50%～60%，通风良好，人工昼夜(12 h/12 h)。实验大鼠分组:行为学实验中LDH 组10 只，假手术组8 只；注射HSV 病毒实验中注射病毒后1～7 d 每天1 组，共7 组，LDH 组和假手术组各6 只。HSV-1 H129(107 pfu/mL)(武汉枢密)，Triton×-100(Amresco 公司)，荧光抗淬灭剂(碧云天)，鼠抗GFP 多克隆抗体(Chemicon)，驴抗鼠免疫荧光抗体(Chemicon)，VFF(von Frey filaments，North Coast Medial Inc)，热痛刺激仪，冰冻切片机(Leica)，OCT 冷冻包埋剂(樱花公司)，正置荧光显微镜(ZEISS)。

1.2 方法

1.2.1 腰椎间盘突出症模型建立:LDH 组大鼠用水合氯醛腹腔注射麻醉后，剃毛、消毒，铺设消毒巾。咬除L5、L6 左侧椎板及关节突，显露左侧L5 和L6 神经根及背根神经节。将大鼠尾腹侧近根部椎间盘髓核组织移植到L5 和L6 神经根表面。假手术组仅作暴露神经根及背根神经节处理，从自体尾椎椎间盘采集髓核但不进行髓核移植。造模结束后立即将10 μL HSV 病毒平均分为5 份，从5个不同注射点注射到左侧后掌足底。……