农璐源，梁书利

（华南理工大学生物科学与工程学院，广东省发酵与酶工程重点实验室，广东广州 510006）

巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是应用最为广泛的真核蛋白表达系统之一，其具有表达量高、适度糖基化、适合高密度发酵、遗传背景清晰等优势。使用强启动子元件提高异源基因的转录水平是提高异源蛋白表达的常用方法。真核生物Ⅱ类启动子的组成部分包括很多短核苷酸序列，即转录因子结合位点，主要可以分为核心元件和上游调控区[1]，核心元件包括决定转录起始位置的TATA盒和转录起始子（DNA在此解开并开始转录）[2]，上游调控区包括CAAT盒、GC盒、减弱子、静息子等等[3]。

巴斯德毕赤酵母常用的Ⅱ类启动子一般分为诱导型启动子和组成型启动子两类[4]。毕赤酵母能够有效地以甲醇为唯一碳源，这是由于毕赤酵母具有甲醇利用途径（MUT途径），其中MUT途径的醇氧化酶1的启动子PAOX1是目前已知的最强的毕赤酵母启动子；以 PAOX1为启动子表达异源蛋白，能够使得异源蛋白在毕赤酵母高效表达。最近，Thomas Vog[5]等人发现，MUT途径过氧化物酶基因的启动子PCAT1在甲醇诱导条件下，活性与PAOX1相当。此外，由于PCAT1在低浓度的葡萄糖中也能被有效地激活，通过PCAT1过表达促进甲醇诱导的转录因子（如Mxr1p、Mit1p等），可以构建无需甲醇的基于PAOX1的毕赤酵母表达系统[6]，这能够促使工业上使用最强的毕赤酵母启动子 PAOX1提高目的蛋白产量的同时，减少易燃易爆的甲醇的使用，并且该表达系统可以用于食品和医药蛋白的生产。……