孟伟阳 李永领 闻浩 潘达 陈健 金灿 叶孙志 陈大庆

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的特征是血管内皮细胞内脂质斑块堆积[1]。血管内皮损伤是AS的始发事件和致病因素，主要由氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）引起[2]。ox-LDL破坏血管内皮细胞氧化还原平衡，导致内皮损伤，从而诱导内皮细胞凋亡[3]。氧化应激通过增加超氧阴离子促进血管壁的低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）氧化，而大量的ox-LDL进一步损害血管内皮细胞[4]。内皮细胞因损伤发生凋亡是AS发展过程中最初但可逆的步骤[5]。因此，预防内皮损伤及细胞凋亡已成为逆转AS的一种治疗策略。研究表明，传统中药三七对血液和心血管系统具有良好的调节作用[6-7]。三七皂苷 R1（notoginsenoside R1,NGR1）是三七中起主要生物学作用的成分，具有抗炎、抗氧化、抗凋亡作用[8-9]。然而，目前关于NGR1是否可以预防ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡以及增强内皮细胞的黏附和迁移能力尚未明确。本研究通过ox-LDL建立AS的体外细胞实验模型，诱导血管内皮细胞凋亡，并且探讨NGR1对ox-LDL损伤的血管内皮细胞保护作用及其机制，为NGR1防治心血管疾病提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 材料 人脐静脉内皮细胞系（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs,h055）购于南京 BERKE biology公司。钙黄绿色（Calcein AM,C2012）购于上海Beyotime公司。NGR1（HY-N0615）购于美国 MedChem-Express公司。结晶紫（HT90132）、二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide,DMSO,D2650）购于美国Sigma公司。CCK-8（CK04）购于日本DOJINDO公司。Transwell小室（3422）购于美国康宁公司。兔抗人B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2，#3498）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax，#14796）多克隆抗体和4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI，#4083）购于美国CST公司。兔抗人Cleaved-caspase-3（ab49822）多克隆抗体以及Dylight 594驴抗兔二抗（ab96921）均购于美国Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养、处理以及分组 HUVECs使用高糖完全培养基（含10%FBS以及100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素）培养，待细胞密度长至80%～90% 时，用PBS将细胞培养液清洗干净后，加入含0.02%EDTA的胰酶消化细胞。……