石莹 王灵聪 周霞庆 蒋慧芳

创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）因其高发病率、高致残率和高病死率，以及造成的社会经济负担，目前仍然是全球医疗界关注的热点问题之一[1-3]。近年来研究发现自噬在TBI中发挥了重要作用[4]，而NF-κB特异性抑制剂吡咯醛二硫氨基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC）对TBI后继发性脑损伤具有保护作用[5]，既往研究发现脑缺血大鼠存在自噬，处理脑缺血能促进脑组织微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）和自噬相关蛋白Beclin1表达上升，减轻脑缺血再灌注损伤[6]；传统中药三七能减轻TBI大鼠脑出血，明显改善神经功能缺陷评分[7]。笔者在上述研究基础上进一步探讨三七、PDTC对TBI大鼠脑组织自噬、神经功能恢复的作用，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 SD雄性大鼠36只，SPF级，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司 [生产许可证号：SCXK（沪）2017-0005]，体重（250±20）g；三七粉购自杭州华东中药饮片有限公司；PDTC（vn27735X）以及自噬抑制剂氯喹（50-63-5）购自美国Sigma公司。p62一抗（ab56416）、Beclin1一抗（ab207612）、LC3一抗（ab128025）购自英国Abcam公司。

1.2 仪器和设备 SpectraMax Plus 384型全波长酶标仪购自美国MD公司，电泳系统、凝胶成像仪购自美国Bio-RAD公司，H1650R型台式高速冷冻离心机购自湖南湘仪公司，TD5A型台式低速离心机购自湖南凯达公司，ZH-RXZ柔性颅骨转购自淮北正华公司，显微镜购自日本OLYMPUS公司（BX43），TECNAI10型透射电镜购自荷兰飞利浦公司。实验前所有仪器设备均校准。

1.3 方法

1.3.1 动物分组、模型制备及处理 按随机数字表法将大鼠分为假手术组（SHAM组）、模型组（M组）、三七组（PN组）、PDTC组（PDTC组）、三七联合 PDTC组（PN+PDTC组）、三七联合氯喹组（PN+CHQ组），每组6只。除SHAM组外，其余各组大鼠均行TBI模型制备：戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉，采用改良的Feeney自由落体模型制备法，具体详见文献[7]。……