宫甜甜，黄少刚，孙瑞珍，申景岭，李秋明，雷 蕾，单智焱

1 哈尔滨医科大学 组织学与胚胎学教研室， 哈尔滨150081；2 哈尔滨医科大学大庆校区 组织学与胚胎学教研室， 黑龙江 大庆163319

肝祖细胞(hepatic-like progenitor cells,HPCs)在肝再生中发挥重要作用。HPCs的微环境是由细胞、细胞外基质成分以及这些细胞所释放的生长因子和细胞因子组成的特殊微环境，这种特殊的微环境和不同成分间的相互作用影响HPCs的增殖和分化[1-2]。肝巨噬细胞具有吞噬异物、传递抗原、清除衰老细胞、参与免疫等作用，是构成肝组织微环境最重要的细胞之一；在肝损伤过程中，巨噬细胞可直接参与肝祖细胞的激活，促进肝损伤修复。研究[3]显示，巨噬细胞对不同类型的干细胞也具有调控作用。巨噬细胞与造血干细胞共培养，能促进红系细胞的分化。巨噬细胞还能促进骨髓间充质干细胞的成骨细胞分化[4]。本研究探讨了巨噬细胞对小鼠诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)向HPCs分化的影响，为阐明HPCs发育的微环境作用奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物与细胞系 8～12周龄C57BL/6N(雌鼠)24只购自维通利华实验动物技术有限公司；实验动物生产许可证编号：SCXK(京)2016-0006，使用许可证编号：No.110011200107063283；体外诱导小鼠iPSCs细胞系(C1细胞)，为实验室冻存。

1.2 主要试剂 DMEM/F12、Neurobasal培养基、KO血清替代物(KOSR)、双抗(P/S)、非必需氨基酸(NEAA)、谷氨酰胺(L-Glu)、N2、B27、丙酮酸钠(Na-Pyr)、β-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol)等试剂均为美国Gibco公司，DPBS、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶明胶等均为美国SIGMA公司。

1.3 HPCs的建立过程及向肝细胞分化 将C1细胞接种在明胶上，培养液为ESM(高糖DMEM)，15% ES级别胎牛血清(ES-FBS)，100 U/L P/S，1%NEAA，2 mmol/L L-Glu，1 mmol/L Na-pyr，1000 U/L白血病抑制因子(LIF)，0.1 mmol/L β-巯基乙醇。……