袁令兴 李秀峰 顾传兰 卢世军 娄庆艳 刘源 林繁录 徐英民

临沂市中心医院泌尿外科276400

0 引 言

肾癌在全球男性中的发病率位于第6 位，在全球女性中的发病率居于第8 位[1]，且在我国的发病率呈现一个逐年递增的趋势[2]。肾癌的死亡率位居全球前十位，是一类严重的恶性肿瘤疾病[3]。近年来，针对天然药物中的抗癌活性成分在肿瘤治疗中的研究越来越多，很多疗效甚佳的天然药物被发掘出来。补骨脂素为传统中药补骨脂的主要化学成分[4]，对众多肿瘤细胞具有显著的抑制作用，有望成为一种疗效显著的抗癌药物[5-7]。然而，补骨脂素对肾癌细胞的影响尚不明确。本研究中，利用体外培养的肾癌细胞系HTB-47 和CRL-1932，观察补骨脂素对肾癌细胞增殖、侵袭能力的影响，探索细胞培养前期的最合适的补骨脂素浓度。此外，分析补骨脂素对细胞增殖抗原（marker of proliferation Ki-67，MKI67）和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）表达的影响，研究其抑制增殖的机制；分析补骨脂素对基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase,MMP2）和MMP9 表达的影响，研究其抑制迁移、侵袭的内在机制。本研究结果可为进一步寻找肾癌新的治疗靶点提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

HTB-47 与CRL-1932 肾癌细胞系（美国ATCC 细胞公司），Ki67/MKI67 抗体（ab156872）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）抗体（ab8245）、PCNA 抗体（ab29）、MMP2抗体（ab92536）、MMP9 抗体（ab76003）、β-acting 蛋白（英国Abcam 公司），补骨脂素（西亚化学科技有限公司），RPMI1640 培养液、胎牛血清（美国Hyclone公司）。

CO2恒温培养箱、Transwell 小室、细胞培养板、细胞培养瓶（美国Thermo Scientific 公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及加药处理

将5 mg 补骨脂素粉末溶于300 μl 二甲基亚砜中制成储存液，保存在-80 ℃环境中。……