王冰月 姜埃利 贾岚 王立华

1天津市第三中心医院肾内科300170；2天津医科大学第二医院肾脏病与血液净化中心300211

0 引 言

良好的血管通路，尤其是动静脉内瘘，是保证维持性血液透析顺利进行，维持患者长期生存的前提，而静脉内膜增生是导致血管通路失功的最常见因素[1]。静脉内膜增生与动静脉内瘘状态下，剪切力的变化与内膜功能紊乱密切相关，其中涉及许多超微结构、细胞基因及信号通路等。有研究结果显示，Kruppel 样因子2（Krüppel-like factor 2，KLF2）及内皮型一氧化氮合成酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）都会受到剪切力作用，发挥不同的生理功能，调节静脉内皮细胞功能。本研究中，分析正常生理及尿毒症状态下剪切力作用对静脉内皮细胞KLF2 及eNOS 表达的影响，从基础理论方面更好地理解动静脉内瘘失功的原因，对临床实际工作中治疗内瘘狭窄或阻塞有重要的意义。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）（上海星博生物科技有限公司），反转录试剂盒（美国Fermentas 公司），聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）试剂盒（美国Roche 公司）。

BK800 细胞培养箱（德国Heraeus Sepatech 公司），XDY-1 倒置荧光显微镜（深圳市博视达光学仪器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与传代

HUVECs 以常规传代培养。细胞复苏后，用含体积分数为10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的DMEM 培养液，在37 ℃、5%CO2无菌培养箱条件下培养细胞，每1～3 天更换一次培养液，当细胞生长至80%以上融合时，胰蛋白酶消化按1∶3 传代，倒置显微镜观察细胞形态。

1.2.2 体外尿毒症培养基配置方法

尿毒症血清取自于天津医科大学第二医院透析中心的规律血液透析患者，所有患者均签署知情同意书。……