大鼠骨髓mMSC和RS细胞肝组织内注射对肝硬化大鼠肝功能及肝脏病变的改善作用观察
2021-03-27谢丽平林涛发郭子宽王少扬
谢丽平,林涛发,郭子宽,王少扬
1 中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院,福建福州350001;2 军事医学科学院放射与辐射医学研究所
肝硬化(hepatic cirrhosis)是由不同病因引起的肝脏慢性、弥漫性改变。目前尚无有效内科治疗肝硬化的方法,肝移植是目前临床公认最有效的治疗方法,但移植价格昂贵、肝源匮乏等因素限制了其临床应用。间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)具有低免疫源性、多向分化潜能、取材方便、来源丰富等优势,目前已被广泛用于肝脏疾病的治疗中。MSC 是一个异质性的细胞群体,体外培养可见多数细胞为梭形成纤维细胞和大而扁平细胞,即成熟MSC(mature MSC,mMSC),同时还可观察到一种圆形细胞,其体积很小、颗粒度很低,命名为快速自我更新细胞(rapidly self-renewing cell,RS 细胞),这类细胞具有更强的多向分化能力[1],认为可能是更原始的干细胞。mMSC、RS 细胞是否可用于肝硬化的治疗中?2020 年2 月—10 月,我们向肝硬化大鼠肝组织内注射mMSC、RS 细胞,比较其抗肝纤维化的效果有无区别,同时体外经HGF 诱导培养后通过RT-PCR 测其ALB、AFP 表达水平,以期进一步探讨RS细胞的肝(样)细胞分化能力。
1 材料与方法
1.1 动物、试剂 6周龄Wistar雄性大鼠36只,2周龄Wistar 雄性大鼠1 只,均购于解放军军事医学科学院,按实验室标准饲料喂养。Mouse anti-Rat CD31-PE、 CD45-PE、 CD11b/c-PE、 CD86-FITC、CD44-FITC(美国 Becton Dickinson 公司),Human HGF(美国 Peprotech 公司),RNAsimple Total Kit、FastKing One Step RT-PCR Ki(t北京天根生化科技公司),Rat anti-AFP Polyclonal Antibody、Rat anti-ALB Polyclonal Antibody(北京嘉美公司),大鼠源白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、β-Actin引物均由奥科鼎盛生物科技有限公司合成。
1.2 大鼠骨髓mMSC、RS细胞分离培养及鉴定
1.2.1 大鼠骨髓MSC分离、培养及鉴定 取2周龄Wistar 雄性大鼠1 只,处死后取胫骨和股骨,剪去……
