范 妮 张海波 王康扬 符 雄

1.海南省文昌市人民医院(571300)；2.海南医学院第二附属医院

因男方因素致女方不孕中免疫性不孕占10%～20%[1]。由抗精子抗体(AsAb)导致的生殖障碍最常见。AsAb阳性已被确认为免疫性不育的诊断指标之一。研究指出[2]，AsAb在正常生育能力的男女血清中无法检测到，但在感染、手术以及外伤等情况下，精子可能触发自身免疫而产生AsAb。目前临床关于AsAb阳性对男性精子的影响说法不一。国外有研究发现[3]，AsAb阳性不育者精子形态、活力与AsAb阴性不育者并无明显差异；但国内报道指出[4]，AsAb阳性不育者精子活率、活力等均明显低于AsAb阴性不育者。故本研究通过观察男性不育患者不同AsAb情况下精子密度、精子活率、精子形态等，分析其相关性及人工授精助孕结局，为临床诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年10月—2020年7月本院接诊的男性不育患者152例，诊断参照《男性不育诊疗指南》[5]。纳入标准：①确诊男性不育；②年龄22～38岁；③患者配偶正常排卵、无输卵管、内分泌等影响生育疾病。排除标准：①既往存在睾丸外伤、活检或手术史；② 输精管阻塞；③生殖道感染；④输精管吻合手术史；⑤合并严重肝肾功能异常、免疫系统、血液系统疾病或恶性肿瘤。患者均签署知情同意书。本研究经本院伦理委员会审批。

1.2 精液AsAb检测

所有患者禁欲2～7 d后手淫法收集精液，采用混合抗球蛋白凝集法检测AsAb；常规处理后采用奥林巴斯CX23光学显微镜(40×10)下镜检，计数100个活动精子，计数附着绵羊红细胞的精子数目(%)，精子数目≤10%为阴性，10%～50%为弱阳性，≥50%阳性。本研究以弱阳性及阳性均判定为阳性。试剂盒购买于安徽安科生物科技有限公司。

1.3 评价指标

①抗体结合部位分类：对AsAb阳性标本按抗体结合部位如精子头、体、尾等分类并记录，阳性黏附率=阳性黏附例数/总例数×100%。②精液常规参数：由同一名检验技术人员按照《人类精液检查与处理实验室手册》检测精子密度、精子总活率、前向活动率、正常形态率等参数，检验结果参照WHO第5版分析标准，正常参考范围：精子密度≥15×106/ml，总活率≥40%，前向活动率≥32%，正常形态率≥4%。比较两组精子密度、精子总活率、前向活动率、正常形态率等参数。随访人工受精助孕结局。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 分组及一般情况

根据AsAb检测结果分为阳性组57例、阴性组95例。阳性组年龄(30.3±4.2)岁(25～36岁)，不育症(6.1±2.8)年(1～10年)；阴性组年龄(30.4±4.1)岁(24～37岁)，不育症(6.3±2.9)年(1～11年)。两组年龄、不育症年限无差异(P>0.05)。

2.2 抗体结合部位分类

AsAb阳性组中，阳性粘附8例，黏附率14.0%。其中尾部黏附运动精子5例，黏附率8.8%；头部黏附运动精子2例，黏附率为3.5%；颈部黏附运动精子1例，黏附率为2.0%。

2.3 精液常规参数比较

AsAb阳性组精子密度、精子总活率、前向活动率、正常形态率均低于AsAb阴性组(P<0.05)。见表1。

表1 两组精液常规参数比较

2.4 人工授精助孕结局

AsAb阴性组人工授精助孕妊娠率(15例，15.8%)与阳性组(6例，10.5%)，流产率(2例，2.1%)与阳性组(2例，3.5%)未见差异(χ2=0.823、0.593，P=0.364、0.441)。

2.5 AsAb与精液常规参数的相关性

AsAb与精子密度、精子总活率、前向活动率、正常形态率均呈负相关(r=-0.520、-0.396、-0.702、-0.411，均P<0.001)。

3 讨论

精子是一种男性机体隐匿性抗原，正常男性机体不会产生AsAb[6]。精液常规参数检查是评估男性生育能力的重要方法，也是诊断男性不育的主要实验室参考指标[7]。AsAb是免疫性不育的病因之一已被临床认可，但其与精液常规参数的关系尚存在争议。

受精形成受精卵过程中只有活动能力强的精子才可穿透宫颈到达子宫[8]。精子前向活动率是评价男性生育能力的重要指标之一。相关文献报道[9]，AsAb会阻碍精子穿过宫颈粘液，干扰精子获能，导致精子发生制动、凝集，并引起精液液化不良，总活率和前向活动率均下降。本研究结果显示，男性不育AsAb阳性组精子总活率、前向活动率均低于阴性组。可见AsAb影响了精子的活力和活动率，进而影响男性生育能力，且相关分析显示AsAb与精子总活率及前向活动率均呈负相关。据报道[10]，AsAb在睾丸的基底膜沉积会显著影响生精微环境，导致精子数量降低，且更易出现形态异常的畸形精子。另外AsAb还可通过抑制顶体酶水平进而降低顶体酶活性，影响精子受精功能。本研究结果显示，男性不育AsAb阳性组精子密度及精子正常形态率均低于阴性组，相关性分析AsAb与精子密度、精子正常形态率均呈负相关。因此，AsAb抗体阳性影响精子密度、总活率、前向活动率并降低精子正常形态率，导致精子质量低下，降低精子受精能力，进而影响精子穿透各种屏障与卵子结合的能力，导致不孕[11]。

本研究分析比较两组人工授精助孕结局显示，AsAb阳性组妊娠率与阴性组未见差异。有研究认为[12]，AsAb具有细胞毒作用，可影响精卵融合，干扰受精卵发育，甚至还可影响胚胎发育。但两组流产率比较无明显差异。可能与本研究纳入样本量少有关，后续将增加样本量进一步研究。

研究指出[13]，AsAb和精子结合部位不同，则对精子产生的影响有所不同，对男性生育能力的影响也不一样。精子头部属于精子最重要部分，由顶体、质膜、核物质以及核膜等构成，其中结合卵子结合带的精子膜受体以及顶体酶在精卵结合中有重要作用。与精子头部结合的AsAb既能通过影响核DNA调控精子凋亡，也可影响顶体酶活性进而干扰精子和卵子结合，阻碍胚胎发育。精子尾部属于运动器官，AsAb结合后会降低精子穿透宫颈粘液的能力，进而影响精子与卵子结合[14]。另外，若AsAb与精子颈中段结合，则可影响该段线粒体DNA，诱使精子凋亡。本研究显示，AsAb阳性组57例中，阳性粘附率14.0%，其中以尾部黏附运动精子较多，其次为头部粘附运动精子。

综上所述，AsAb阳性对精子密度、精子总活率、前向活动率、精子形态以及人工受精助孕结局有明显影响，是导致男性不育的重要因素之一。