刘 琼 张 欣 冯 燕 朱 琰

上海中医药大学附属曙光医院(200021)

子宫内膜癌易发于围绝经期和绝经后女性[1]。在我国发病率居女性生殖系统恶性肿瘤第2位[2]。化学疗法是目前标准治疗方法。化疗药物顺铂为抗癌药[3]。但患者可能会产生对顺铂耐药性，大大降低治疗效果。驱动蛋白家族成员14(KIF14)是潜在的致癌基因，参与各种癌症转移[4]。目前多数研究认为，KIF14过表达可能导致快速且易出错的有丝分裂，从而在肿瘤发生过程中诱导非整倍性[5]；过表达的KIF14促进恶性肿瘤，如视网膜母细胞瘤、前列腺癌和卵巢癌[6-8]。然而，关于KIF14在子宫内膜癌发生中的作用研究较少。因此，本研究通过分析KIF14基因对顺铂子宫内膜癌耐药细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响，探讨子宫内膜癌有效治疗方法。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

子宫内膜癌细胞Ishikawa、子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP(中国科学院上海细胞库)；Trizol试剂盒、Promega反转录试剂盒、SYBR green(美国Thermo公司)；siRNA-KIF14、siRNA-NC(美国圣克鲁斯公司)；LipofectamineTM 2000 试剂盒(invitrogen公司)；RT-qPCR引物(上海捷瑞生物工程有限公司)；ki-67兔单克隆抗体(ab9260，美国Merck公司)、KIF14兔多克隆抗体(ab71155)、Bax兔单克隆抗体(ab32503)、MDR1兔单克隆抗体(ab170904)、P-gp兔多克隆抗体(ab262880，英国Abcam公司)；β-actin兔单克隆抗体(#4970)、cleaved-Caspase-3兔单克隆抗体(#9661)、山羊抗兔IgG二抗(#7074，德国CST公司)。CFX96 Touch实时荧光定量PCR系统(美国Bio Red公司)、流式细胞仪(美国Thermo 公司)。

1.2 RT-qPCR和western-blot检测KIF14表达

使用Trizol试剂盒提取子宫内膜癌细胞Ishikawa及子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中的总RNA。通过Promega反转录试剂盒合成cDNA，使用SYBR green在 CFX96 Touch实时荧光定量PCR系统上进行定量PCR。条件如下：95℃下热循环10 min，95℃预变性30 s，变性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸15 s，循环40次。……