郑增光，王鹏雁

恶性黑色素瘤是恶性程度极高的皮肤黏膜恶性肿瘤，常起病隐匿，不易引起重视，确诊时多有淋巴结或远处转移，5年生存率仅16%[1]，且发病率有逐年升高趋势[2]。Toll 样受体（TLRs）是一种模式识别受体，广泛存在于人体免疫细胞及多种上皮细胞中。最近研究表明多种肿瘤细胞表面亦表达TLRs，且与肿瘤的发生、发展及转移密切相关[3-4]。TLR4 是TLRs受体家族中的一员，可通过与配体[如脂多糖（LPS）]结合促进炎症介质的合成与释放。有研究表明TLR4 可促进乳腺癌、卵巢癌及肺癌等肿瘤的增殖、转移及免疫逃逸[3,5-6]。近年发现TLR4 在恶性黑色素瘤组织中的表达比例较高，TLR4的表达增高与患者预后差相关[7-8]。然而，TLR4 在黑色素瘤中发挥何种作用尚不明确。本研究拟采用LPS刺激A375细胞，模拟慢性炎症的细胞微环境，探讨抑制TLR4 的表达对黑素瘤A375 细胞增殖、迁移的影响及其可能的机制，以期为恶性黑色素瘤新的靶点治疗提供理论依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 材料 人黑色素瘤A375 细胞株购自上海中科院细胞库；青霉素-链霉素溶液（美国Gibco 公司）、细胞计数试剂盒CCK8（日本同仁生物公司）；胎牛血清、DMEM 细胞培养基（美国Gibco 公司）；LPS（Sigma公司）；Resatorvid（Selleck 公司）；抗体TLR4、-actin（CST 公司）；IL-10 Elisa 试剂盒（酶联生物公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 A375 细胞株采用含10%胎牛血清（FBS）、100 U/ml青霉素和100 g/ml 链霉素的DMEM 培养基，在5% CO2，37 ℃恒温箱内培养，取其对数生长期用于实验。其中对照组细胞仅接受10%胎牛血清的DMEM 培养基培养。其他组除10%胎牛血清的DMEM培养基外，另加一定量的LPS 和Resatorvid 并调整相应药物浓度，LPS 组（LPS 5 g/ml）、TLR4 抑制组（Resatorvid 100 mol/L）、LPS+Resatorvid 组（LPS 5 g/ml+Resatorvid 100 mol/L）。……