江 梅 姜经航 邵 帅 王 洋 丁 涛

(湖北省荆门市第二人民医院生殖医学中心，荆门市 448000，电子邮箱：124558444@qq.com)

宫腔粘连是人工流产、诊断性刮宫等宫腔操作的常见并发症，可导致继发不孕和反复流产[1]。病理学研究结果表明子宫内膜纤维化参与宫腔粘连形成，可有效降低子宫内膜纤维化程度或有助于治疗宫腔粘连[2-3]。二甲双胍是治疗2型糖尿病的一线用药。研究显示，二甲双胍通过抑制转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)促使细胞外基质合成的相关蛋白表达下调，从而发挥抗纤维化的效应[4]。目前，尚未发现将二甲双胍应用于治疗宫腔粘连的研究报道。本研究通过构建大鼠宫腔粘连模型，观察口服二甲双胍在促进子宫内膜修复、恢复生育能力方面的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 6～8周性成熟雌性SD大鼠45只，体重150～200 g，9～10周性成熟雄性SD大鼠15只，体重400～530 g，购于湖北省实验动物中心(SCXK2015-0018)。饲养条件：普通级别，自然光线，室温维持在24℃～26℃，定期消毒。

1.2 主要试剂及仪器 TGF-β1抗体、Smad 3抗体、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)抗体、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)抗体以及内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase， GAPDH)、二抗均购于英国Abcam公司(批号分别为：ab215715、ab95455、ab2413、ab32575、ab181603、ab205719)，含蛋白酶抑制剂的裂解液(批号：P0013B)、DC蛋白鉴定试剂盒(批号：P10012S)均购自碧云天公司， TRIzol试剂购于美国Thermo公司(批号：1218355)，逆转录试剂盒(批号：639547)、PCR试剂盒(批号：RR037A)以及TGF-β1、Smad 3、FN、α-SMA、内参GAPDH基因引物(见表1)均购自大连Takara公司。SMZ800N型倒置显微镜购自日本Nikon公司，ABI7500型荧光定量PCR仪购自美国ABI公司，041BR128118型双向电泳仪购自美国Bio-Rad公司。

表1 引物序列

1.3 实验方法

1.3.1 刮宫联合感染法构建宫腔粘连大鼠模型：取30只SD雌性大鼠，采用随机数字表法将其分为对照组和造模组各15只。……