张 玮， 杨广越， 沈东晓， 马文婷， 陶 乐， 吴 柳， 严 萍， 刘 成

上海中医药大学附属普陀医院 a.实验中心肝病实验室， b.感染科， 上海 200062

肝纤维化是机体对多种慢性损伤的一种修复应答，以细胞外基质过度沉积为特征[1]，可发展为肝硬化导致严重并发症[2]，包括门静脉高压、肝衰竭和肝细胞癌[3]。胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor，GDNF)是TGFβ超家族成员[4]，课题组前期发现GDNF通过ALK5/Smad信号促进肝星状细胞(HSC)活化和肝纤维化[5]，因此抑制GDNF可能是抗肝纤维化的新靶点。

下瘀血汤出自汉·张仲景《金匮要略》，由大黄、桃仁、土鳖虫3味中药组成，三药合用共奏活血化瘀之功，课题组前期用其治疗肝纤维化取得了良好的临床疗效[6]，并发现下瘀血汤抗肝纤维化主要通过抑制NF-κB和TGFβ1/Smad信号通路[7]；减少肠上皮细胞凋亡，减轻紧密连接的破坏而抑制肝纤维化进展等[8]。但下瘀血汤是否能通过调控GDNF来抗肝纤维化还需要进一步探究。本文采用CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型，以肝纤维化过程中GDNF表达及功能为切入点，观察下瘀血汤通过抑制GDNF来抗肝纤维化的效应机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 雄性C57BL/6小鼠，清洁级，18～20 g，购自上海斯莱克实验动物公司，生产许可证号：SYXK(沪)2017-0005。小鼠饲养于上海中医药大学附属普陀医院实验动物中心，使用许可证号：SYXK(沪)2018-0032。饲养室环境温度为(22±1)℃，相对湿度为30%～60%，12 h光照/12 h黑暗，自由进食和饮水。

1.1.2 细胞 GFP-Col-HSC细胞由美国加州大学圣地亚哥分校Ekihiro Seki教授馈赠，人原代HSC细胞购自Sciencell公司(货号：5300)。GFP-Col-HSC细胞培养于2%FBS+1%青霉素和链霉素的DMEM中，人原代HSC细胞培养于10%FBS+1%青霉素和链霉素的DMEM中。……