理气舒心片中间体特征图谱研究

2021-03-14林建梅王卉玲

人参研究 2021年1期

展月，徐云，林建梅，王卉玲，徐建

（1.吉林修正药业新药开发有限公司，吉林省中药标准化关键工程技术重点实验室，长春130103；2.吉林长白山药业集团股份有限公司，白山134300）

理气舒心片由当归、沉香、茯苓、木香等18味中草药精制而成，本品主要功效为解肝郁，行气滞，祛胸痹。用于气滞血瘀症冠心病，心绞痛，心律不齐，气短腹胀，胸闷心悸，近年来有文献报道理气舒心片在冠心病，心绞痛治疗上取得良好的治疗效果[1]。处方中部分的三棱、青皮和其余当归、茯苓、香附、佛手、陈皮、枳实、枳壳、麦芽、香橼、三棱、丹参等10味，加水进行提取，浓缩成浸膏为理气舒心片中间体，为有效控制水提取部位的质量，提高终产品的批间一致性。本研究对理气舒心片中间体建立特征图谱，用于生产过程中的质量控制，有效保证产品质量的均一、稳定。具体研究如下：

1 材料

1.1 试剂

乙腈、磷酸均为色谱纯（美国TEDIA试剂公司）；甲醇为分析纯；水为纯化水。

1.2 仪器

AE205DU型分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；KQ-300DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Ultimate 3000高效液相色谱仪DAD检测器。

1.3 试药

理气舒心片（吉林长白山药业集团股份有限公司，批号：T190601、T190602、T190603、T190604、T190605、T190606、T190607、T190907、T190908、T190909）；柚皮苷（批号：110752-201313）、橙皮苷（批号：121551-201103）、新橙皮苷（批号：171241-200506）、丹酚酸B（批号：171237-200807）、阿魏酸（批号：110773-200611）均购于中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性[2-4]

色谱柱：Agilent-ZORBAX SB-PHenyl C18色谱柱，（250mm*4.6mm，5μm）；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0～5min，5%A→40%A;5～25min，10%A→15%A；25～40min，15%A→20%A；40～65min，20%A→30%A；65～70min，30%A→35%A。）流速为1ml/min；检测波长为286nm；柱温为35℃，进样量：10μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备

取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、阿魏酸适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml分别含200μg的混合溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液制备方法[5,6]

取本品浸膏约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇50ml，称定重量，超声处理（400W，40KHZ）30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验

取理气舒心片中间体供试品溶液连续进样6次，记录色谱图，暂以柚皮苷峰为参照峰，比较各共有峰的相对保留时间，计算结果RSD值均小于1%，仪器测试精度符合要求。

2.3.2 重复性试验

取理气舒心片中间体6份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样，记录色谱图，暂以柚皮苷峰为参照峰，比较各共有峰的相对保留时间，计算结果RSD值均小于1%，试验方法的重复性良好。

2.3.3 稳定性试验

取理气舒心片中间体供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、18、24h进样，记录色谱图，暂以柚皮苷峰为参照峰，比较共有峰的相对保留时间，计算RSD值均小于1%，供试品溶液在24h内稳定性符合测试要求。

2.4 特征图谱建立及特征峰归属

取10批理气舒心片中间体（1～10号样品），按以上选定的供试品溶液制备方法和检测方法进行检测，得到10批样品的高效液相色谱图。将10批样品的测试数据导入《国家药典委员会.中药特征图谱相似度评价系统（2012）》软件进行处理，经多点校正，将谱峰自动匹配，生成共有模式。暂以柚皮苷峰为参照峰，确定了18个特征峰。从结果可以看出，10批样品特征图谱中特征峰的相对保留时间基本一致，RSD均小于1%。根据10批样品的特征峰相对保留时间平均值，确定特征峰规定值为：0.088（峰1）、0.18（峰2）、0.32（峰3）、0.36（峰4）、0.50（峰5）、0.56（峰6）、0.64（峰7）、0.74（峰8）、0.83（峰9）、0.94（峰10）、1.00（峰11）、1.04（峰12）、1.05（峰13）、1.15（峰14）、1.21（峰15）、1.25（峰16）、1.34（峰17）、1.37（峰18）。暂定其相对保留时间应在规定值的±5%之内[7-9]。结果见表1、2，附图1、2。

取当归、茯苓、香附（醋制）、佛手、陈皮、枳实（炒）、青皮（醋制）、枳壳（炒）、麦芽（炒）、香橼、三棱（醋制）、丹参等12味药材，分别粉碎成细粉，按理气舒心片中间体特征图谱检查方法分别制备供试品溶液，进样测定。经色谱图比较，并DAD检测器下进行分析：峰1归属枳壳，峰2归属枳壳、三棱，峰3归属青皮，峰4归属陈皮，峰5归属枳壳、枳实、陈皮、香橼、青皮，峰6归属陈皮、青皮，峰7归属青皮，峰8归属当归，峰9归属枳壳，峰10归属枳壳、枳实、陈皮、青皮，峰11归属枳壳、香橼，峰12归属枳壳、佛手、枳实、陈皮、青皮，峰13归属枳壳，峰14归属枳壳、香橼，峰15归属枳壳、香橼，峰16归属丹参，峰18归属枳实、陈皮、青皮，峰17没有明显归属。详见附图3。

采用对照品确认的方式，应用DAD检测器进行峰分析，对特征峰进行指认：峰8：阿魏酸；峰11（S）：柚皮苷；峰12：橙皮苷；峰13：新橙皮苷；峰16：丹酚酸B。详见附图4。

3 讨论

中药特征图谱是一种综合的，可量化的质量控制方法，可用于全面评价中药制剂的质量及其稳定性，本研究中按照中国药典及相关文献，在供试品的提取方法上，考察了甲醇、70%甲醇、50%甲醇不同溶剂超声提取，结果表明，以70%甲醇为溶剂的特征图谱中色谱峰数目及分离效果均优于以甲醇为溶剂的特征图谱，且较以50%甲醇为溶剂的供试品溶液易过滤，故选择以70%甲醇作为提取溶剂。试验选择了20min、30min和45min超声提取进行考察。超声提取20min、30min和45min色谱图差异不大，为了保证提取充分并节约时间，确定提取时间为30min。试验选择了乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸水为流动相进行考察，结果，采用乙腈-水系统色谱图中，色谱峰较少；采用乙腈-0.2%磷酸水系统为流动相较乙腈-0.1%磷酸水系统色谱图无明显变化，考虑到色谱柱的耐酸性等因素，确定流动相组成为乙腈-0.1%磷酸水系统[10,11]。

理气舒心片组方药味多，成分复杂，采用特征图谱来反映并评价其质量是一种比较科学的手段，其优点在于可以全面地反映不同药味的化学成分，表征制剂质量。本研究建立的理气舒心片中间体特征图谱，可以归属中间体中的当归、青皮、枳壳等10味药材，采用对照品确认的方式，应用DAD检测器进行峰分析，对阿魏酸、柚皮苷等5个特征峰加以指认。本研究建立的理气舒心片中间体特征图谱检测法，经方法学验证，精密度高、重现性和耐用性均较好，且方法简便，为该品种生产过程质量控制提供了有效方法，为理气舒心片的质量控制方法的提升和完善提供了数据支持，可较直观的反映出产品的批间一致性，能更全面地把控理气舒心片的质量。

附表