崔琳娜， 蒋校文， 黄华庆， 陈金勇

1.郴州市第一人民医院口腔科 南华大学转化医学研究所，湖南 郴州（423000）； 2.南方医科大学口腔医学院，广东 广州（510515）

牵张成骨作为口腔颌面外科及整形外科治疗先天、后天畸形缺损等的重要整复手段在临床上具有明显优势，目前其治疗周期长、并发症相对较多等不足限制其临床广泛应用［1-2］。学者们使用了生长因子、细胞治疗、基因治疗等多种治疗手段试图促进成骨缩短治疗周期，但均停留在实验层面，上述治疗手段不仅价格昂贵，且受到伦理、安全等因素限制，短时间难以在临床广泛推广。近来研究发现，山奈酚（kaempferol，Kae）不仅具有抗氧化、抗炎、抗癌等作用，而且能够防治骨质疏松、促进成骨。本研究以多单元细胞拉伸装置为平台，对Kae 处理后的小鼠骨髓间充质细胞（bone marrow mesenchymal cells，BMMCs）施加周期性单轴牵张力，同时通过工具药抑制内源性哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mammalian target of rapamycin complex 1，mTORC1）信号通路的表达，旨在观察Kae 促进细胞张应力下成骨分化过程中该信号通路的作用，为改善牵张成骨效果提供实验基础。

1 材料和方法

1.1 材料

3 月龄雄性小鼠（南华大学转化研究所动物实验中心，SYXK ＜湘＞2020-0002）。

多单元细胞拉伸装置（四川大学）；分光光度仪（Roch，瑞士）；流式细胞仪（Thermo，美国）。Percoll 分离液（Phamacia，美国）；10%胎牛血清（Hyclone，美国）；LG-DMEM 培养液（Gibico，美国）；二甲 基 亚 砜（Dimethylsulfoxide，DMSO）（Thermo，美国）；茜素红S 染色液（索莱宝，中国）；细胞碱性磷酸酶（alkalinephosphate，ALP）试剂盒（建成，中国）；骨钙素（osteocalcin，OCN）试剂盒（RD，美国）；BCA蛋白定量试剂盒（Thermo，美国）；Trizol 试剂盒（Gibico，美国）；反转录试剂盒（Takara，大连）。pmTOR 一抗（Abcam，英国）；p-S6K 一抗（Cell Signaling，美国）；……