戴兴德，郑小芳，火文琴，张小林

甘肃医学院药学系，甘肃 平凉 744000

青霉素残留是乳制品行业一个重要监控指标［1-2］，为逃避打击，一些不法商贩在牛乳中添加抗生素分解剂（β-内酰胺酶）以分解牛乳中残留青霉素。β-内酰胺酶又称青霉素酶，可水解青霉素类物质而使其失效［3］，常用于青霉素药品的无菌试验［4］。β-内酰胺酶会造成β-内酰胺类抗生素耐药性，危害消费者身体健康［5］，因此，实施牛奶中β-内酰胺酶定量十分必要。目前，β-内酰胺酶的检测方法有碘量法［6-8］、pH 法［9-10］、微生物法［11-16］、高效液相色谱法［17］、紫外光度法［18］等，这些方法过程复杂，大多以定性为主，检出限偏高。

青霉素分子中的硫原子可将Fe3+还原为Fe2+（青霉素水解产物青霉噻唑酸与Fe3+不反应），Fe2+与［Fe（CN）6］3-反应生成可溶性普鲁士蓝 KFeⅢ［FeⅡ（CN）6］，β-内酰胺酶阻止该显色反应，吸光度值（A）下降，可根据ΔA计算β-内酰胺酶的浓度。本研究根据该原理建立牛奶制品中β-内酰胺酶残留量的普鲁士蓝显色光度法，并进行优化及验证。

1 材料与方法

1.1 样品 脱脂奶粉及鲜牛奶均为市售产品。

1.2 主要试剂 β-内酰胺酶冻干粉（批号：B1728048，标示量为10 MU）购自上海一研生物科技有限公司；青霉素钠（标示量：400万单位，总质量：2.4 g）购自哈药集团有限公司；硫酸铁铵（分析纯）及硫氰酸钾（分析纯）购自天津市瑞金特化学品有限公司。

1.3 溶液的制备 β-内酰胺酶储备溶液：将β-内酰胺酶冻干粉用1 000 mL的PBS溶解，采用碘量法［6］标定；β-内酰胺酶标准溶液：临用前将储备溶液稀释为200 U／mL；800 U／mL青霉素溶液：称取0.12 g青霉素钠，用pH 7.0的PBS溶解，定容至250 mL（1 mg青霉素钠效价为 1 667 U）；……