李乐，蒙国基，于玉根

深圳万乐药业有限公司，广东 深圳 518029

近20年来，单克隆抗体被证明具有强大的治疗潜力，在肿瘤、自身免疫性疾病等治疗中发挥重要的作用，成为全球靶向治疗药物市场的主流［1］。单克隆抗体为一种复杂的四聚体糖蛋白大分子，一般呈异质性，即包含形态、大小、疏水及电荷等相关的异构体。抗体分子携带电荷的差异成为电荷异构体（包含酸性及碱性异构体）。抗体在发酵期可发生不同过程的修饰，导致同一批发酵抗体的电荷异质性［2-3］。这些修饰包括脱酰胺化、糖基化、不完全二硫键形成、N-端焦谷酰胺环化及C-端赖氨酸修饰等［4］。研究发现，抗体分子电荷异构体能改变抗体与体内靶点的结合，影响抗体药物的组织分布及药代动力学［5-7］。因此，为确保抗体药物对人体的有效性及安全性，其生产工艺应包含以去除或降低这些异质性杂质含量的纯化步骤［8］。根据国际协调会议（In-ternational Conference on Harmonization，ICH）指导原则，对异质性药物应规定异质体的质量，且应对其表征及概况进行监测，以保证批间一致性。《中国药典》三部（2015版）人用重组单克隆抗体制品总论中要求采用适宜的方法检测供试品的异质体，并尽可能对其进行鉴别，规定可接受标准。因此，分离电荷异构体，获得均一性抗体是其关键点，尤其在生物类似物开发过程中应尽可能控制异构体含量与原研药保持一致。

在抗体纯化过程中，通常使用多种层析技术进行多步纯化，才能将目的蛋白与杂质或异质体分开。……