董威 ，袁军，李红 ，陈煜 ，刘昊智 ，2，李津 ，庄再成 ，吴克

1.武汉博沃生物科技有限公司，湖北 武汉 430075；2.华东理工大学生物工程学院，上海 200237

异脲键连接反应是多糖-蛋白结合疫苗生产中过程中连接多糖与载体蛋白的常用方式之一［1］。1-氰基，4-二甲氨基吡啶四氟硼酸盐（1-cyano-4-dimethylamino-pyridinium，CDAP）是一种可用于异脲键连接反应中多糖活化的试剂，多应用于脑膜炎球菌结合疫苗、流行性嗜血杆菌结合疫苗、肺炎球菌结合疫苗及A族乙型溶血性链球菌疫苗等多糖-蛋白结合疫苗的工艺［2-5］。与广泛使用的溴化氰活化剂（多糖活化率为1%～2%）比较，使用CDAP多糖的活化率可高达50%［6］，且其毒性较低，更易储存［6-7］；CDAP虽能在水溶液的环境中活化多糖，但在水溶液中并不稳定，在中性水溶液中数小时即降解，而在碱性水溶液中则会迅速降解［6］。目前，已有多篇文献报道CDAP活化多糖制备的结合疫苗中残留CDAP的测定方法［8-9］，但基于CDAP在中性和碱性水溶液中不稳定的特点，其在水溶液中的降解产物也应纳入相关疫苗的杂质检测中。

核磁共振波谱（nuclear magnetic resonance spectrum，NMR）分析作为一种定性手段，常应用于药品杂质的研究中。参考欧洲专利（EP 1 162 998 B1）［0113］项［10］的描述，在肺炎球菌结合疫苗的制备过程中应进行 4-二甲氨基吡啶（4-dimethylaminopyridine，DMAP）残留的测定，因此，本研究采用一维核磁氢谱（1H-NMR）及碳谱（13C-NMR）对 CDAP及DMAP进行检测，以确认CDAP降解产物的结构，并测定降解程度。

1 材料与方法

1.1 样品 CDAP和DMAP均购自美国Sigma公司，其中CDAP纯度为99.7%。

1.2 主要试剂及仪器 重水（99.9%）购自美国Sigma公司；NaOH（分析纯）购自国药集团化学试剂有限公司；600 MHz核磁共振波谱仪购自美国瓦里安公司；……