倪 红，周兴星，喻慧岭

0 引 言

喉癌是临床常见头颈部恶性肿瘤之一，喉鳞状细胞癌是喉癌的主要病理类型，既往研究显示吸烟、饮酒等环境因素与喉癌发病密切相关[1-2]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一种非编码小RNA，并可通过调控下游靶基因表达从而参与多种生理病理过程[3]。部分miRNA在喉癌发生发展过程中发挥抑癌或促癌作用[4]。但仍有部分miRNA在喉癌发生及转移过程中的调控机制尚未阐明。微小RNA-33b(microRNA-33b，miR-33b)在骨肉瘤细胞中呈低表达，上调其表达可通过靶向乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A，LDHA)而抑制骨肉瘤细胞增殖[5]。miR-33b可通过靶向抑制高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2，HMGA2)的表达而抑制食管鳞状细胞癌迁移及侵袭[6]。但miR-33b在喉癌发生及转移过程中的作用机制尚未可知。靶基因预测网站Targetscan预测显示上游转录因子1(upstream transcription factor 1，USF1)可能是miR-33b的靶基因，USF1在胃癌、宫颈癌等肿瘤中呈高表达并可促进肿瘤的发生及发展[7-8]；但miR-33b是否可通过靶向调控USF1而参与喉癌发生发展过程尚未明确。本研究主要探讨miR-33b、USF1在喉癌组织及细胞中的表达，观察miR-33b过表达、沉默USF1表达后喉癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的变化，分析miR-33b与USF1在喉癌发生及转移过程中的靶向调控作用，为揭示喉癌发病机制奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂正常支气管上皮细胞16HBE与喉癌细胞TR-LCC-1均购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。杜氏改良培养基(DMEM)、胎牛血清(FBS)均购自上海玉博生物科技有限公司。甲基噻唑基四唑(MTT)、二 喹 啉 甲 酸(BCA)蛋白定量检测试剂盒、二甲基亚砜(DMSO)均购自上海晶抗生物工程有限公司；……