丁闻洁，赵继开，吴佳君，韩昱晨

肺癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一。患者的5年生存率低于20%，主要死亡原因是复发和转移。根据NCCN指南TNM分期标准，即使肿瘤直径≤3 cm，只要侵犯脏层胸膜，应归为T2期，而非T1期。因此对肺癌患者进行准确临床分期具有重要意义，正确判断肿瘤是否侵犯脏层胸膜尤为重要[1-2]。本科室在实际工作过程中采用维多利亚蓝弹力纤维染色结合免疫组化双重染色，能清楚地显示肺癌组织弹力纤维与肿瘤细胞间的关系，以准确判断是否存在胸膜侵犯。

1 材料与方法

1.1 材料选取上海市胸科医院2018年手术切除的肺腺癌标本42例，所有患者术前均未接受放、化疗。标本经10%中性福尔马林固定、常规脱水、石蜡包埋，3 μm厚切片。

1.2 试剂(1)维多利亚蓝染液的配制：维多利亚蓝2 g，糊精0.5 g，间苯二酚4 g，蒸馏水200 mL；将蒸馏水倒入500 mL烧杯中，加入维多利亚蓝、糊精和间苯二酚溶解，慢火中煮沸；再用另一只烧杯煮沸30%三氯化铁液25 mL，慢慢倒入维多利亚蓝混合液中，继续煮沸3 min，不断搅拌呈胶体物。冷却后过滤，将沉渣和滤纸放在60 ℃烧箱内烤干。取另一只烧杯盛70%乙醇400 mL溶解沉渣，再加入冰醋酸4 mL和苯酚6 g作为防腐剂，放置1周成熟后使用。(2)免疫组化试剂：一抗TTF-1购自上海泉辉公司，calretinin购自北京中杉金桥公司，二抗系统、DAB显色液购自罗氏诊断产品(上海)公司。(3)免疫组化仪器：Benchmark XT全自动免疫组化机，罗氏诊断产品(上海)公司。

1.3 方法在同一张切片上行免疫组化双重染色及弹力纤维染色。首次染色采用免疫组化法：(1)将切片置于60 ℃电热培养箱中烤2 h后，放入Benchmark XT全自动免疫组化机中，EZ prep脱蜡1次，每次10 min；……