吉佳乐，曾 晖，徐 丹，张 宇，林 爽，姚馨悦，何志承

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)是临床上最常见的淋巴系统恶性增殖性疾病，占整个淋巴瘤的90%以上，发病率和病死率位居恶性肿瘤前10位，且呈逐年增加的趋势[1]。目前临床上最常见的两种NHL分别是黏膜相关淋巴组织(mucosa associated lymphoid tissue, MALT)淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)。Ki-67作为反应细胞增殖的重要标志物，其增殖指数(proliferation index, PI)高低可用于淋巴瘤分级鉴别诊断和预后指导，且Ki-67 PI值越高，患者预后越差[2]。在病理诊断工作中，通常采用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)方法对Ki-67表达进行检测，其结果判读的准确性和稳定性至关重要。ASCO/CAP指南指出处理手术病理标本时，常规HE切片厚度应在4～5 μm，但对IHC切片厚度并没有给出明确标准。因此，本文选取了2、4、6、8 μm 4种切片厚度，对石蜡切片厚度与IHC染色中惰性淋巴瘤和侵袭性淋巴瘤组织Ki-67表达的影响进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 标本来源收集陆军军医大学第一附属医院2016年4月～2019年4月收治的淋巴瘤标本46例，其中MALT淋巴瘤18例，年龄46～78岁；DLBCL 28例，年龄27～77岁；所有患者术前均未进行任何治疗。

1.2 主要试剂及仪器Ki-67、OptiView DAB IHC Detection Kit购自美国Ventana公司；BenchMark XT全自动免疫组化染色机购自美国Ventana公司。

1.3 IHC标本经固定脱水后制成蜡块，并分别以2、4、6、8 μm厚度连续切片，60 ℃烤片备用。将制备好的切片放入BenchMark XT中，并设定相应程序进行染色：75 ℃烤片4 min；EZ Prep溶液76 ℃脱蜡4 min；Cell Conditioning Solution(CC1)抗原修复液99 ℃修复30 min；抑制剂孵育45 min；加入Ki-67抗体60 μL，37 ℃孵育40 min；Reaction Buffer Concentrate(10×)缓冲液清洗5 min；37 ℃下二抗孵育8 min；DAB显色8 min，苏木精Ⅱ衬染12 min，返蓝液返蓝4 min。

1.4 IHC结果判定平均阳性染色面积百分比(average positive staining area percentage, APSAP)，可反映相应病例染色结果中的阳性细胞表达情况。……