陈静 张函 顾玉露 丁小强 章晓燕

200032 上海，复旦大学附属中山医院肾内科

慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)是一种严重危害人类健康的慢性疾病。RNA甲基化主要发生在N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine，m6A)位点[1]。m6A修饰在基因表达调控、mRNA剪接、RNA稳定性等方面扮演重要角色[2]。m6A修饰主要由甲基化酶(writers)、去甲基化酶(erasers)和识别蛋白(readers)所调控，参与RNA剪接、出入核、蛋白质翻译及降解等多种生物学过程[3-5]。甲基化RNA免疫共沉淀结合高通量测序(Methylated RNA Immunoprecipitation with next generation sequencing，MeRIP-seq)[5]，使用N6-甲基腺嘌呤抗体富集高甲基化的RNA片段，并通过结合高通量测序，能够高效精确的在全转录组范围内检测发生甲基化的RNA区域。通过使用这一技术，我们可以比较不同细胞、组织、样本间的RNA甲基化修饰模式的差异，发现疾病发生、发展过程中的关键生物学改变[6-7]。

近年研究表明，m6A在肿瘤发生、发展中发挥重要作用[1]。但在肾脏纤维化发生过程中m6A变化如何、扮演什么角色？目前还不明确。本研究基于MeRIP-seq数据库解析肾脏纤维化发生过程中RNA m6A的变化，筛选出差异基因和关键通路，初步确定参与调控RNA m6A的关键甲基酶，为肾脏纤维化的RNA甲基化机制研究提供重要理论参考。

材料与方法

一、实验动物与试剂

1.动物 健康的6～8周龄雄性小鼠(种系C57BL/6)，重量19～24 g，购自上海杰思捷生物科技有限公司，自由进食饮水。

2.试剂 PrimeScript RT试剂盒(日本Takara公司)、RNAiso Plus(Trizol)(美国Thermo公司)、SYBR Green PCR试剂盒(日本Takara公司)

二、方法

1.动物模型与实验分组 C57BL/6小鼠适应环境7 d。采用随机数字表法分成2组：假手术组(Sham组)(n=6)、肾脏纤维化组(UUO组)(n=6)。UUO组经小鼠背部右侧切口将小鼠右侧输尿管游离、结扎并剪断，Sham组仅游离右侧输尿管不结扎。……