柯 超，蒋 斌，周红见，李全富

胃癌在全球范围内均有较高的致死率，胃癌细胞的无限增殖和局部、远处转移是预后不佳的主要原因[1]，然而，胃癌增殖侵袭机制的研究尚无突破性进展。大量证据[2-3]表明，miRNA在多种癌症中存在表达异常，可能参与细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等过程。因此，识别肿瘤特异性miRNA，将有利于肿瘤的诊断、治疗及预后。据报道[4]，miR-381在胃癌中低表达，可调控LRH-1、Twist1表达抑制胃癌细胞的增殖和侵袭。调控跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A，TMEM16A)属于钙离子激活的氯离子通道蛋白，参与细胞信号转导、平滑肌收缩等[5]。研究[6]发现，miR-381可靶向TMEM16A抑制胃癌细胞上皮间质转化。该研究旨在明确miR-381和TMEM16A的靶向关系，观察miR-381是否通过TMEM16A影响胃癌细胞AGS生物学行为，为胃癌的治疗提供有效分子靶点。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1.1组织 选取2018年3月—2019年3月行手术切除的胃癌患者34例，采集其癌组织及癌旁正常组织(距癌低于3 cm)，组织样本保存于液氮罐中；患者经术后病理检测确诊为胃癌，知情且同意本次采集，本研究经武汉市第三医院伦理委员会批准。

1.1.2细胞株 胃癌细胞AGS、MKN45、SGC7901和正常人胃黏膜细胞GES-1购自上海生物细胞研究所，胃癌细胞的生物学特性见表1。

表1 胃癌细胞AGS、MKN45、SGC790的生物学特性

1.2 主要试剂与仪器胎牛血清、RPMI1640培养基、DMSO(美国Gibco公司)，引物序列由江苏百奥迈科生物技术有限公司合成，脂质体3000试剂盒(美国Invitrogen公司),逆转录试剂盒(美国GeneCopoeia公司),荧光素酶报告系统(美国Promega公司),MTT粉末(上海广锐生物科技有限公司),FITC-Annexin V/PI试剂盒(德国Miltenyi公司),Transwell小室(上海子起生物科技有限公司),蛋白一抗(美国Cell Signaling公司),细胞培养箱(上海轩仪仪器设备有限公司),qRT-PCR仪(美国BioRad公司),流式细胞仪(美国BD公司)。……