郭亚萍，王秀菊，胡亚平，张 金，李勇莉

腰椎退行性病变常见于临床，是引起下腰痛的重要因素之一[1]。目前，腰椎退行性病变的发病机制尚不明确，但多数学者认为髓核细胞(nucleus pulposus cells，NPCs)病理学改变是主要原因[2]。NPCs的减少引起细胞外基质(extracellular matrix，ECM)降解是椎间盘退行性改变的病理基础，而NPCs大量凋亡是导致椎间盘细胞减少的直接原因[3]。因此寻找能抑制NPCs凋亡及ECM降解的药物对于防治椎间盘退行性病变意义重大。小檗碱(berberine，BBR)为季胺类化合物，具有抗感染、改善糖脂代谢及预防退行性改变等作用[4]。但是，目前鲜见有关BBR用于治疗腰椎退行性病变的研究。该研究探究BBR对NPCs凋亡及ECM降解的影响及其作用机制，为开发对NPCs具有保护作用的治疗药物以及BBR的临床应用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物5只SDF级SD雄性大鼠，体质量160～180 g，4周龄，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号SCXK(京)2017-0022。

1.2 主要试剂及仪器BBR(云南明镜亨利制药有限公司)，bFGF(珠海亿胜生物制药有限公司)，DEME细胞培养基(美国Life Technology公司)，胰酶(美国ScienCell公司)，胎牛血清(美国ScienCell公司)，TRIzol 试剂盒(美国 Invitrogen 公司)，恒温细胞培养箱(美国Thermo公司)，酶标仪(上海赛默飞世尔公司)，离心机(意大利A. L. C 公司)，流式细胞仪(美国FCMXBD公司)，光学显微镜(日本Olympus公司)，冰冻切片机(美国Sigma公司)，电泳仪及电泳槽(北京六一仪器厂)，PCR扩增仪(美国Eppendorf公司)，光学显微镜(日本Olympus公司)。

1.3 实验方法

1.3.1NPCs细胞分离与培养 断颈处死大鼠后，依据文献[5]所述方式采用序贯酶消法分离NPCs，接种于含有10%胎牛血清的细胞培养基中，经反复吹打后制成细胞悬浮液，置于恒温细胞培养箱(37 ℃、5%CO2)中进行传代培养，取第4代细胞进行后续细胞实验。……