醌茜素抑制PI3K通路的磷酸化对宫颈癌CaSki细胞凋亡和自噬的影响
2021-01-18王华斌干晓琴丁勇利李永文刘智涛李玥桦
王华斌,干晓琴,丁勇利,李永文,刘智涛,李玥桦
宫颈癌是一种妇科生殖道恶性肿瘤,主要由于高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)持续感染所致。目前已成为危害全球女性健康的重大疾病,且新发病率和死亡率还在持续上升[1-2]。宫颈癌中鳞状细胞癌占比高达75%~80%,而鳞状细胞癌中HPV16基因型最多见。研究[3]表明宫颈癌Caski细胞含有完整的HPV16型基因,因而对其进行研究并找到控制方法意义重大。醌茜素即1,2,5,8以-四羟基蒽酮(1,2,5,8-tetrahydroxyanthraquinone,Quinalizarin)是一类蒽醌类化合物,主要存在于鼠李科植物翼核果内[4]。研究[5]表明醌茜素能抑制人肝癌Huh7细胞增殖和存活,诱导细胞凋亡。较高浓度的醌茜素能够有效抑制人肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡,可能成为靶向治疗非小细胞肺癌的新型药物[6-7]。但醌茜素对宫颈癌的作用却少有报道,该文旨在探究醌茜素对宫颈癌Caski细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制,从而为宫颈癌治疗提供可能的参考方向。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器SPF级C57BL/6雄性小鼠(6~8周龄,体质量20~25 g),购自四川省人民医院实验动物研究所,许可证号:SCXK(川)2018-15;人宫颈癌Caski细胞(中国典型培养物保藏中心)。RPMI 1640培养基、四季青胎牛血清、醌茜素(德国MERCK公司),BrdU、5-氟尿嘧啶(上海皓元生物医药科技有限公司),胰蛋白酶、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)(美国Sigma公司),Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(上海碧云天生物技术研究所),3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)(广州华大基因科技有限公司),兔来源Actin、Ki67、ATG5、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62、AKT、p-AKT、PI3K、mTOR、p-PI3K、p-mTOR、Cleaved caspase-3、caspase-3、LC3单克隆抗体(美国CST公司),FACS Calibur型流式细胞测定仪(美国Becton-Dickinson公司),激光共聚焦显微镜(FV3000)(日本奥林巴斯公司)。……
